第十章遗传重组要.pptVIP

当前第30页\共有71页\编于星期三\11点 当前第31页\共有71页\编于星期三\11点 当前第32页\共有71页\编于星期三\11点 当前第33页\共有71页\编于星期三\11点 D环在DNA聚合酶的作用下修补而扩展，直至D环的长度与“受体”DNA双螺旋缺口长度相当，互补的两条单链退火。此时在缺口的两侧各有一段异源双链DNA，两个杂合双螺旋之间为断裂的缺口，并且此缺口为供体DNA序列所填充。 缺口处双链的完整性可以被以缺口3’端为起始的修补合成来修复。缺口是被两次单链DNA的合成而修复的。 当前第34页\共有71页\编于星期三\11点 当前第35页\共有71页\编于星期三\11点 当前第36页\共有71页\编于星期三\11点 第三节 大肠杆菌重组的分子基础 在分子水平上，重组事件发生的先后顺序是相似的：从一个已断裂的分子中产生的单链与其对应的双螺旋发生作用，配对区间扩展，重组中间体形成直到核酸内切酶解离此两个双螺旋分子。 识别反应是重组机制的不可分割的重要部分，并且只涉及到DNA分子的特定区域而不是整个完整的染色体。 当前第37页\共有71页\编于星期三\11点 一、 chi位点和RecBCD核酸酶 在λ噬菌体的一些突变种内，存在一些称为chi的位点。chi位点单一的碱基对的改变即可激发重组的发生。这些位点皆含有一个恒定的非对称的8bp序列： 5’ GCTGGTGC 3’ 3’ CGACCACC 5’ 当前第38页\共有71页\编于星期三\11点 Chi位点是一个由基因recBCD编码的Rec BCD酶作用的靶部位。 RecBCD酶是一种多功能酶，具有几种不同的活性。它是一个强有力的降解DNA的核酸酶，早期被检定为活性核酸外切酶V，具有解旋酶的活性。 RecBCD 所介导的解旋和切割可以被用来产生末端，并引发异源双链的形成。 当前第39页\共有71页\编于星期三\11点 当前第40页\共有71页\编于星期三\11点 当前第41页\共有71页\编于星期三\11点 当前第42页\共有71页\编于星期三\11点 二、RecA和Holliday连接体的形成 RecA具有两种相当不同的活性: RecA可以促进单链DNA 与其在双链DNA 分子中互补的DNA 链的碱基相配对。 RecA还可以在SOS 反应中激活蛋白酶。 RecA 需要单链DNA和 ATP才能激活蛋白酶。 当前第43页\共有71页\编于星期三\11点 RecA能够利用由RecBCD在Chi位点附近切割所释放的单链3’末端。 RecA的DNA操作酶活性可以使一个单链DNA与双螺.旋中的同源序列发生置换，这一反应被称为单链摄取(single-strand uptake)或单链同化(single-strand assimilation)。 当前第44页\共有71页\编于星期三\11点 当前第45页\共有71页\编于星期三\11点 当前第46页\共有71页\编于星期三\11点 当前第47页\共有71页\编于星期三\11点 三、Ruv蛋白和 Holliday连接体的拆分 大肠杆菌有一组由三个基因编码与随后的重组相关联的蛋白。 ruvA 和 ruvB 基因的产物促进异源双链的形成。Ruv A 蛋白可以识别Holliday连接体的结构，Ruv B是一个腺苷三磷酸酶并可能提供支链迁移的动力。 当前第48页\共有71页\编于星期三\11点 Ruv A在交叉点处与DNA所有的4条链相结合，在交叉点的上游，两个Ruv B六聚体环状结构分别与每个双螺旋相结合。 RuvAB蛋白复合体可以使支链以10～20 bp的速度迁移。 当前第49页\共有71页\编于星期三\11点 当前第50页\共有71页\编于星期三\11点 所谓遗传重组指的是遗传物质的重新组合，其共有的特征是DNA双螺旋之间的遗传物质发生交换。遗传重组的存在确保了遗传物质代与代之间基因组的重排，从而形成一个物种内部个体之间的遗传差异。 遗传重组不仅仅发生于代与代之间，一个个体的基因组也可以发生重排。重组不只是在减数分裂和体细胞核基因中发生，也在线粒体基因间和叶绿体基因间发生。 当前第1页\共有71页\编于星期三\11点 当前第2页\共有71页\编于星期三\11点 当前第3页\共有71页\编于星期三\11点 遗传重组的证明 当前第4页\共有71页\编于星期三\11点 突变和重组是提供进化起始物质的两个过程。 突变引起的遗传改变能引起蛋白质中氨基酸序列的变化，该变化引起表型的改变，通过自然选择发生作用。 重组提供一个基因组结构的变化，也会引起表型的变化，也通过自然选择发挥作用。 当前第5页\共有71页\编于星期三