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高效液相色谱分析 第一页,共三十五页,2022年,8月28日 一、HPLC与经典LC区别 主要区别:固定相差别,输液设备和检测手段 1.经典LC:仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm,固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低(H↑,n↓) 分析周期长 无法在线检测 2.HPLC:分离和分析 柱内径2~6mm,固定相粒径10μm(球形,均匀装柱) 高压输送流动相 柱效高(H↓,n↑) 分析时间大大缩短 可以在线检测 第二页,共三十五页,2022年,8月28日 二、HPLC与GC差别 相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测 主要差别:分析对象的差别和流动相的差别 1.分析对象 GC:能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品, 高沸点、挥发性差、热稳定性差、 离子型及高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC:溶解后能制成溶液的样品, 不受样品挥发性和热稳定性的限制 相对分子质量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛,占有机物的80% 第三页,共三十五页,2022年,8月28日 2.流动相差别 GC:流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用 HPLC:流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素,对分离起很大作用 流动相种类较多,选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3.操作条件差别 GC:加温操作 HPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小) 提高柱内填料装填的均匀性,减小粒度 第四页,共三十五页,2022年,8月28日 三、高效液相色谱仪流程图 1.贮液器(滤去颗粒状物质) 2.高压泵(15000~35000KPa)流量稳定 及梯度洗提装置 3.进样装置 4.色谱柱——分离 5.检测器——分析 6.废液出口或组分收集器 7.记录装置 灵敏度高,重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感 第五页,共三十五页,2022年,8月28日 高效液相色谱仪的色谱柱 内径:4.6mm或3.9mm;长度:15~30cm 第六页,共三十五页,2022年,8月28日 球形填料 不规则形填料 填料颗粒度:3~5μm 湿法匀浆装柱技术 第七页,共三十五页,2022年,8月28日 空柱管: 200-300元 国产填料 国产装填 = 800-1000 元 进口填料 国产装填 = 1200-1500 元 原装 进口柱 = 2400-3000 元 HPLC 柱 = 空柱管 + 填料(分离介质) 价格? 第八页,共三十五页,2022年,8月28日 检测器:紫外光度检测器、荧光检测器、 示差折光检测器、电导检测器、 蒸发光散射检测器 第九页,共三十五页,2022年,8月28日 高效液相色谱仪的生产厂家 Waters Agillent Shimadz Perkin Elmer Varian 大连依利特公司 北京东西电子研究所 制造商 戴安 第十页,共三十五页,2022年,8月28日 第十一页,共三十五页,2022年,8月28日 高效液相色谱仪LC-2010HT 岛津(香港)有限公司 第十二页,共三十五页,2022年,8月28日 新一代液相色谱∶Alliance Alliance 第十三页,共三十五页,2022年,8月28日 产品名称:液相色谱仪器 大连依利特 返回 第十四页,共三十五页,2022年,8月28日 四、HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一广” 高柱效(n=3万片/米), 柱效高(远高于一般LC) 高灵敏度(紫外检测器最小检出量达纳克级) 高压(150*105~350*105Pa) 分析速度快 应用范围广泛(可分析80%有机化合物) 第十五页,共三十五页,2022年,8月28日 HPLC应用 医药方面:生物组织 、血样、尿样分析,药剂组 分测定,药物生产控 制,药代研究。 生化方面:主要用于氨基

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