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演示文稿第三章外植体的选择和灭菌 当前第1页\共有35页\编于星期四\3点 第三章外植体的选择和灭菌ppt课件 当前第2页\共有35页\编于星期四\3点 第一节 外植体的选择 1 外植体部位 2 取材季节 3 器官的生理状态和发育年龄 4 选取适宜的大小 当前第3页\共有35页\编于星期四\3点 1 外植体部位 植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、髓细胞、表皮、块茎的贮藏薄壁细胞、花瓣、根、叶、子叶、鳞茎、胚珠和花药等。 不同种类的植物以及同一植物的不同器官对诱导条件反应不一致的。 大多数植物来说，茎尖是较好的部位，其形态已基本建成，生长速度快，遗传性稳定，是获得无病毒苗的重要途径。 当前第4页\共有35页\编于星期四\3点 外植体选择的原则 培养材料的来源是否保证是否会引起不良变异。 叶片的来源最有保证，许多植物的组织培养以叶片为外植体。 对一些培养较困难的植物，可以通过子叶或下胚轴来建立其组织培养再生体系。 当前第5页\共有35页\编于星期四\3点 2 取材季节 在生长开始的季节取材，若在生长末期或已进入休眠时取样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。 当前第6页\共有35页\编于星期四\3点 3 器官的生理状态和发育年龄 植物上部器官的生长时间虽短，其生理年龄却较老，更接近发育上的成熟，越容易形成花器官。而越向基部，则生理年龄越小。 下部组织越易形成营养器官，上部组织易形成花器官。 通常年幼组织比年老组织有较高的形态发生能力，容易培养，有较大的再生能力。 当前第7页\共有35页\编于星期四\3点 4 选取适宜的大小 材料太大易污染；材料太小，难于成活。 。 如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小 当前第8页\共有35页\编于星期四\3点 第三章 外植体的选择和灭菌 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 当前第9页\共有35页\编于星期四\3点 1 外植体的灭菌方法 预处理：先对植物组织修整，去掉不需要的部分，流水中冲洗干净。 预处理的植物材料的灭菌： 原则： 充分灭菌，但不伤外植体 不同的外植体，灭菌的要求也不一样 当前第10页\共有35页\编于星期四\3点 2 常用灭菌药剂的使用和效果 灭菌剂 使用浓度（%） 清除的难易 消毒时间 （min） 效 果 次氯酸钠 10-30 易 5—30 很好 次氯酸钙 2 易 5—30 很好 漂 白 粉 饱和浓度 易 5—30 很好 氯 化 汞 0.01—1 较难 2—10 最好 酒 精 70—75 易 0.2—2 好 过氧化氢 10—12 最易 5—15 好 溴 水 1—2 易 2—10 很好 硝 酸 银 1 较难 5—30 好 抗 菌 素 4—50mg/L 中 30—60 较好 当前第11页\共有35页\编于星期四\3点 常规的表面灭菌处理方法 ①把材料放进70%的酒精中约30s。 ②用0.1%的升汞（HgCl2）中浸泡5-10min。 或用10%的漂白粉上清液中浸10min～ 15min。 ③无菌蒸馏水冲洗3～5次。 ④灭菌时进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好 的接触。 ⑤在灭菌剂里滴入数滴0.1%的Tween20（吐温） 或Tween80湿润剂，则灭菌效果更好。 当前第12页\共有35页\编于星期四\3点 1）表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。 2）与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。 3）若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。 4）HgCl2效果最好，但对实验材料的危害最大，要用水冲洗至少5次。 消毒注意事项 当前第13页\共有35页\编于星期四\3点 第三章 外植体的选择和灭菌 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 当前第14页\共有35页\编于星期四\3点 第三节　污染原因和预防措施 1、污染的原因 污染——是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。 当前第15页\共有35页\编于星期四\3点 1.1 污染的原因： 从病源菌方面：主要有细菌及真菌两大类； 从污染的途径： 外植体带菌 培养基 器皿灭菌不彻底 操作人员未遵守操作规程等引起的。 当前第16页\共有35页\编于星期四\3点 1.2 细菌污染的特点： 菌斑呈粘液状物，而且在接种后1～2天即可发现。 原因：材料带菌 培养基灭菌不彻底 操作