DB37_T 2661-2015毛皮动物克雷伯氏菌病诊断技术.pdf

ICS 65. 020. 30B 41DB37山東东省地方标准DB37/T2661—2015毛皮动物克雷伯氏菌病诊断技术Diagnostic Techniques for Klebsiella Pneumoniae Disease of Fur Animal2015-04-20发布2015-05-20实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 2661—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：山东省动物疫病预防与控制中心、山东大学生命科学学院，本标准主要起草人：王贵升、王金宝、田夫林、张婷婷、要秀云、谢之景、于青海、张伟、马慧玲、孙圣福、孔祥华、徐鸿、楚遵锋、汪洋。I DB37/T 2661—2015毛皮动物克雷伯氏菌病诊断技术1范围本标准规定了毛皮动物克雷伯氏菌病的诊断技术要求，克雷伯氏菌的分离与鉴定技术。本标准所规定的病原菌分离与鉴定技术适用于水貂、孤狸和的克雷伯氏菌病的诊断，其他动物多考使用。2病原菌的分类和致病性克雷伯氏菌属于肠杆菌科（Enterobacteriaceae）克雷伯氏菌属(Klebsiella)，共有12个种，其中常见的克雷伯氏菌包括4个种，即肺炎克雷伯氏菌（K.pneumoniae)、催产克雷伯氏菌(K.oxytoca)、土生克雷伯氏菌(K.terrigena)和植生克雷伯氏菌(K.planticola)。该菌为条件性致病菌，其中肺炎克雷伯氏菌致病性较强。3初步诊断3.1概述毛皮动物克雷伯氏菌病以支气管炎、肺炎，败血症，脑膜炎，腹膜炎，腹泻等为主要症状。根据典型临床症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现革兰氏阴性短杆菌，可初步判定本病。但确诊应依据病原分离与鉴定。3.2急性型3.2.1临床主要症状发病突然，体温升高41℃～41.5℃（水貂），精神高度沉郁，呼吸圈难，很快死亡。3.2.2典型病理变化发病动物充血、淤血、血凝不良。化脓性或纤维素性肺炎，心内、外膜炎。肝脏肿大，质硬脆弱脾脏肿大，呈紫黑色。肾有出血点或出血性梗死3.3麻痹型3.3.1临床主要症状食欲不振或废绝，后肢摊换，运动障碍。病程23天，多死亡告终。3.3.2典型病理变化肾和脾脏肿大，膀胱积尿，粘膜肿胀增厚3.4蜂窝织炎型 DB37/T 2661—2015病貂喉部出现蜂离织炎，向颈部蔓延，直达屑部，形成肿胀，化脓，3.5脓疱疗型周身皮肤出现小脓疱，破溃后流出白色或淡蓝色脓汁，局部淋巴结肿大。内脏为败血症变化。克雷伯氏菌的分离与鉴定4. 1设备和材料4.1.1设备生物安全柜、恒温培养箱、生化培养箱、生物显微镜4. 1.22培养基和试剂麦康凯-肌醇-亚碲酸甲（或羧青霉素）选择培养基，营养琼脂，各种细菌生化鉴定管。自动鉴定仪配套试剂。4.2检测流程参见图1。2 DB37/T 2661—2015标本(组织)肠杆菌选择性培养营养琼脂36℃±1℃18~24 小时36℃ ±1℃18~24 小时红色菌落灰白色粘液菌落接种环挑之，易拉成丝选取可疑菌落，革兰氏染色镜检，革兰氏阴性短杆菌常见的生化鉴定试验自动鉴定仪生化试验36℃ ±1℃18~24 小时报告图1检测流程4.3操作步骤4.3.1取样无菌操作，取发病动物病变明显的肝、脾、心血或肾等。4.3.2分离培养无菌操作，涂布或划线于麦康凯-肌醇-亚碲酸钾选择培养基平板和普通营养琼脂平板上，置36℃士1C培养18～24小时。疑似为克雷伯氏菌的塔养特性如下：在麦康凯-肌醇-亚硫酸钾选择培养基上，菌落呈红色：在普通营养琼脂上形成较大的灰白色粘液菌落，以接种环挑之，易拉成丝。4.3.3形态与染色特性 DB37/T 2661—2015生物显微镜下克雷伯氏菌革兰氏阴性、无鞭毛不能运动的直杆菌，两端钝圆略尖，大小为（0.3~1.0）μm×（0.6~6.0）m。单个、成对或短链状排列，培养后呈多形性。4.3.4常见的生化鉴定试验4.3.4.1生化鉴定管接种无菌操作勾取典型菌落接种各种生化鉴定管，置36℃±1℃培养18～24小时。4. 3. 4. 2结果判定氧化酶试验阴性，葡萄糖产酸产气，但也有不产气菌株，MR试验阴性，VP试验阳性，不产生硫化氢，不液化明胶，分解尿素，还原硝酸盐。克雷伯氏菌属4个种的特性见附永A。4. 3. 55自动鉴定仪生化试验4.3.5.1氧化酶试验如氧化酶试验阳性，则判为克雷伯氏菌阴性：如氧化酵试验阴性，则执行4.3.5.2进一步鉴定样品，4. 3.5. 2其他生化试验取纯培养的细菌接种于相应的生化试验检测试剂，参照说明书，判读试验结果。5鉴别诊断必要时与大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、巴氏杆菌、铜绿假单胞菌等鉴别诊断。克雷伯氏菌鉴别诊断生化特性见附录A。6结果报告按诊断技术规程分别进行初步诊断、病原菌分离培养、生化