神经干细胞的研究现状与应用前景演示文稿.pptVIP

（1）反复传代法：取3～4个月龄的人胚胎纹状体或孕 14～16天小鼠、大鼠胚胎大脑，机械分离制作单细胞悬液。在含多种神经因子的无血清培养基中培养，实现NSC的体外稳定有效扩增。经过长期培养反复传代可使NSC得到纯化。 （2）流式细胞术：Sasaki等采用流式细胞仪对约60种细胞表面抗原进行筛选，结果发现分选出的具有CD133+/CE34+/CD45-（细胞表面抗原）的细胞为NSC。 （3）基因转导：Keyoung 等利用腺病毒为载体,将置于归巢素和Msi1增强子和启动子控制下的绿色荧光蛋白基因导入人胚胎细胞,然后对胚胎细胞进行体外培养,只有NSC能特异性地出现绿色荧光蛋白。再利用流式细胞仪进行荧光筛选,能进一步将NSC收集起来。 （4）免疫磁珠细胞分选法：利用磁珠表面的特异性抗体与NSC表面抗原结合，在磁场作用下使结合磁珠的NSC与其他细胞分离，从而得到较纯化的NSC。 神经干细胞的分离与纯化 当前第31页\共有46页\编于星期四\5点 神经干细胞的鉴定 　　1990年，Lendahl的实验证实，神经干细胞的标志蛋白是神经上皮干细胞蛋白（nestin）．Nestin在神经胚形成时开始表达，随着神经细胞的迁移和分化的完成，Nestin的表达量逐渐下降甚至完全停止。目前，Nestin已被用于神经干细胞的鉴定。 培养的小鼠神经干细胞　　　　　　胚胎小鼠脑侧室　　　　　　　　胚胎小鼠纹状体 当前第32页\共有46页\编于星期四\5点 Sakakibara等人鉴定出一种RNA结合蛋白即 Musashi ,可作为NSC的标志物。 (Sakakibara et al. 1996) E10 E14 Ventricular zone of spinal cord 当前第33页\共有46页\编于星期四\5点 神经干细胞的研究现状与应用前景演示文稿 当前第1页\共有46页\编于星期四\5点 （优选）神经干细胞的研究现状与应用前景 当前第2页\共有46页\编于星期四\5点 基本知识 当前第3页\共有46页\编于星期四\5点 干细胞（Stem cell，SC）是一类具有自我更新（self-renewing）能力的多潜能细胞，即干细胞保持未定向分化状态和具有增殖能力，在合适的条件或给予合适的信号，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称其为“万用细胞”，也有人通俗而形象地称其为“干什么都行的细胞”。 干细胞来源于胚胎、胎儿组织和成年组织如骨髓、脐带等。干细胞技术最显著的作用就是：能再造一种全新的、正常的甚至更年轻的细胞、组织或器官。 干细胞技术是近年现代生物科技继克隆技术、基因工程之后的第三大科学成就。 它不仅促使人们重新熟悉细胞生长与分化的基本生命原理，也为多种难治性疾病的治疗带来了划时代的革命。21世纪是生命科学的时代，也是为人类的健康长寿创造世界奇迹的时代，干细胞的应用将有广阔前景。 干细胞的概念 当前第4页\共有46页\编于星期四\5点 神经干细胞的定义 1989年，Temple等从13天大鼠胚胎脑隔区取出细胞进行培养，发现这些细胞发育成神经元和神经胶质细胞。其后从成年鼠纹状体、海马齿状回等处分离出能在体外不断增殖，并具有向神经元和星形胶质细胞分化潜能的细胞群。 20世纪90年代后，许多实验都证实，人脑内也同样存在神经干细胞。 目前得到普遍认可的神经干细胞的概念是由Mckay在1997年提出的：神经干细胞(neural stem cell，NSC)是指具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新并能提供大量脑组织细胞的细胞群。 当前第5页\共有46页\编于星期四\5点 (Okano et al. 2002) 当前第6页\共有46页\编于星期四\5点 神经干细胞的分化、增殖及其影响因素 1． 生长因子： 　　FGF－2（碱性成纤维细胞生长因子－2）在胚胎早期维持神经祖细胞的的生存，促进其增殖。 　　ECG（神经表皮生长因子）在发育较晚期促使神经祖细胞增殖和分化。 　　BDNF（脑源性神经营养因子）及IGF1（胰岛素样生长因子1）主要促进祖细胞向神经元方向分化。 2． 细胞因子：红细胞生成素、集落刺激因子、白介素家族等影响神经元的发育；BMP（骨架多型性蛋白）促进神经干细胞向星形胶质细胞方向分化。 3． 移植区域的信号：一是选择性调控，即信号只能调节干细胞的存活和增殖而不能影响其分化方向。二是指导性作用，指特异性指导神经干细胞、祖细胞向特定谱系分化。 4．神经干细胞和神经祖细胞自身产生多种调控信号。 5． Nestin基因和Notch基因：人nestin基因第二个内含子中存在一个（〈400bp区域〉对神经干细胞起增强作用。这个增强子也对早期神经干细胞其他基因表达起作用，包括Notch基因。Notc