NY_T 3639-2020CN中华猕猴桃品种鉴定 SSR分子标记法.pdf

ICS 65.020.01B 05NY中华人民共和国农业行业标准NY/T3639—2020中华猕猴桃品种鉴定SSR分子标记法Identification of Actinidia chinensis cultivars using SSR markers method2020-07-27发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3639—2020附录B(规范性阳录）溶液配制B.1DNA提取溶液的配制DNA提取溶液的配置使用双蒸水。B.1.11mol/L氢氧化钠溶液称取40g氢氧化钠，溶于800mL水中，冷却至室温后，定容至1000mL。B.1.20.5mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液(pH8.0)称取186.1g乙二胺四乙酸二钠盐，加人800mL水，再加人20g氢氧化钠，搅拌。待乙二胺四乙酸二钠盐完全溶解后，冷却至室温。再用氢氧化钠溶液（1mol/L)准确调pH至8.0,定容至1000mL，在103.4kPa(121C)条件下灭需20min。B.1.30.5mol/L盐酸(HCI)溶液量取25mL浓盐酸于烧杯中，加人少量水稀释，混匀冷却至室温后，用玻璃棒引流至容量瓶中，再加少量水清洗烧杯后用玻璃棒引流至容量瓶中，反复几次后，加水定容至500mL，上下颠倒混匀后，转到广口瓶中，B. 1. 4称取60.55gTris碱游于约400mL水中，加盐酸溶液(0.5mol/L)调pH至8.0,加水定容至500mL,在103.4kPa(121C)条件下灭菌20min，B.1.52%(W/V)十六烷基三甲基澳化铵(2×CTAB)溶液分别称取20g十六烷基三甲基漠化铵、81.816g氧化钠和20g聚乙烯吡咯烷酮溶于约700mL水mol/L,pH8.0)，加水定容至1000mL，B.1.65mol/L NaCI溶液称取292.2g氯化钠，溶于750mL水中，在磁力搅押器上搅拌溶解，加水定容至1000mL，在103.4kPa灭菌20 min,B.2PCR扩增溶液的配制PCR扩增相关溶液的配制使用双蒸水。B.2.1SSR引物稀释开盖前瞬时离心10s，按说明书分别配制前引物和后引物终浓度均100μnol/L的储存液，各取10pL加90μL双蒸水至终浓度10μmol/L的工作液。B. 33变性聚丙烯酰胺凝胶电泳相关溶液的配制变性聚丙酰胺凝胶电泳相关溶液的配制使用双蒸水。B.3.130%丙烯酰胺溶液(W/V)分别称取290g丙烯酰胺和10g甲叉双闪烯酰胺溶于约800mL水中，加水定容至1000mL，置于棕色瓶中4C储存，B.3.26%变性PAGE胶(W/V)甲基乙二胺，加水定容至60mL，7 NY/T 3639—2020B.3.3亲和硅烷工作液吸取1mL无水乙醇，加人10μL亲和硅烷和10μL冰醋酸，混匀。B.3.4别离硅烷工作液量取2mL的二甲基二氰硅烷，加8mL的三氯甲烷，混勾。B.3.510%过硫融铵溶液(W/V)称取0.1g过硫酸铵溶于1mL水中。B.3.610×TBE缓冲液分别称取108g三羟甲基氨基甲烷和55g硼酸溶于约800mL水中，加人37mL乙二胺四乙酸二销溶液(0.5mol/L)，加水定容至1000mL。B.3.75×TBE缓冲液量取500mL的10×TBE缓冲液，加水定容至1000mL，B.3.81×TBE缓冲液量取500mL的10XTBE缓冲液，加水定容至5000mL。B. 4银染溶液的配制银染溶液的配置使用蒸馏水，B.4.1固定液量取100mL冰酷酸，加水定容至1000mL，B.4.2染色液称取1g硝酸银，溶于1000mL水中，B.4.3显影液称取10g氢氧化钠溶于1000mL水中，用前加2mL甲醛。 NY/T3639—2020录c(规范性附录)核心引物名单及序列9对引物名单及序列见表C.1.表C.19对引物名单及序列引物编号物名称引1物序列(s→3)P01UDK96-001F,GAATCGCGTAATGATTGATGGR;GTTTCCCACTCTGCAAAAGCP02UDK96-015F,CCGAGTCATGATCGAGTTGAR;GGCTCAACTTGGAGAAGTGGP03UDK96-016F, TTAGGTGAAAGACACACCACACR:ATAAACGTCATGGGCTCAGCP04UDK96-026F;CGCTGACCAGATTCTGATGAR: TTGAAAATCACTGAGCACAACCP05UDK96-030F, TCATGTTTGTGGTTGAGTTGTGR: AGCAATAAACTCAAGCGCGTP06UDK96-034F:TTATATGGTGCGGCATGCTAR, TGAATGCAGAAGGCAATCAGP07UDK96-040F:TCGAGTTACCTAGCTACT