DB37_T 3632-2019渔业用水中多西环素、四环素、土霉素、金霉素残留量的测定　高效液相色谱法.pdf

ICS13. 060Z 16DB37山 東东省地方标准DB37/T3632—2019渔业用水中多西环素、四环素、土霉素、金霉素残留量的测定高效液相色谱法Determination of doxycycline, tetracycline, oxytetracycline, chlortetracyclineresidues in fishery water by high performance liquid chromatography (HPLC)2019-07-23发布2019-08-23实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 3632—2019目次前言1I1范围.2规范性引用文件3原理.4试剂与配制.5仪器和设备，6试样的测定.6.1样品的制备6.2样品的提取净化6.3标准曲线的制备6.4测定7计算.8检测限9回收率10精密度附录A（资料性附录）色谱图 DB37/T 3632—2019前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。本标准由山东省渔业标准化技术委员会(鲁TC03)归口。本标准起草单位：济宁市渔业监测站。本标准主要起草人：史艳伟、孟丽华、时彦民、刘方、吴广州、蒋帮铜、孟娟、邓晨曦、简康、时兵。 DB37/T 3632—2019渔业用水中多西环素、四环素、土霉素、金霉素残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了渔业用水中土毒素(Oxytetracycline）、四环素（Tetracycline）、金毒离(Chlortetracycline）、多西环素（Doxycycline，Vibramycin又名强力霉素、脱氧土霉素）残留量的测定原理、试剂与配制、仪器和设备、试样的测定、计算、检测限、回收率与精密度等。本标准适用于渔业用水中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量的测定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理水样经HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱仪配紫外检测器测定，外标法定量。t试剂与配制所用试剂除另有规定外，均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682一级水标准。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙：色谱纯。4.3磷酸：色谱纯。4.4磷酸二氢钠。4.50.01mo1/L磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠1.56g，用950ml水溶解，磷酸调pH至2.5，用水稀释并定容至1000mL，i过0.45μm水相滤膜备用。4.6土莓素标准品：(CAS:2058460)纯度≥96. 0 %。4.7四环素标准品：(CAS:64755) 纯度≥94.0 %。4.8金毒素标准品：（CAS：64-72-2）纯度≥99.0%。4.9多西环素标准品：（CAS：24390-14-5）纯度≥98.0%。4. 10土毒素、四环素、金毒素、多西环素标准储备液：分别准确称取土霉素标准品0.0100g，四环素标准品0.0100g，多西环素标准品0.0100g，金霉素标准品0.0200g，用甲醇溶解并定容至100mL，制得土霉素、四环素、多西环素浓度分别为100μg/mL，金霉素浓度为200μg/ml的标准储备液，-18C避光保存，有效期6个月。1 DB37/T 3632—20194.11土毒素、四环素、金毒素、多西环素混合标准使用液：分别移取4.10中的标准储备液10.0叫，定容至100ml，制得土霉素、四环素、多西环素浓度为10μg/mL，金莓素浓度为20μg/mL的混合标准使用液，0C4避光保存，有效期2周。仪器和设备5.1液相色谱仪，配紫外检测器。5.2氮吹仪。5.3超声波清洗器。5.4超纯水仪。5.5涡旋混合器。5.6分析天平：感量0.0001g5.7HLB同相萃取柱：60mg，3mL，或性能相当者。5.8抽滤装置。试样的测定6. 1样品的制备水样经0.45μ滤膜过滤，备用。6.2样品的提取净化固相萃取小柱预先用3mlL甲醇、3mL水活化，准确量取60mL经过滤后的水样（6.1），转移至固相萃取柱中，控制流速不超过2mL/min，用5mL水淋洗小柱，抽干，用8mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10ml具塞玻璃离心管中，于40℃下氨气吹干，残留物用1.0mL流动相溶解定容，涡旋混合1min，超声2min，过0.45μ滤膜，供液相色谱测定。6.3标准曲线的制备分别准确移取0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL混合标准使用液（4.11），用流动相定容至100mL，制得一系列浓度的混合标准工作液，使其中土霉素、四环素、多西