农杆菌介导codA基因遗传转化‘GF43’李的研究的开题报告.docxVIP

农杆菌介导codA基因遗传转化‘GF43’李的研究的开题报告 一、选题背景及研究意义： 李是我国北方主要果树之一，由于其美味以及营养丰富，深受人们的喜爱。但是李树生长缓慢，耐寒性差，在干旱和高温环境下容易枯萎，生产中的病虫害也不容忽视。因此，如何提高李树的耐逆性、增强其抗病虫害能力就成为了李树产业的一个热门研究领域。 植物生长发育和环境逆境对植物抗性的影响及其机制一直是植物学和作物学领域中的热门研究话题。以工程生物技术为手段，研究外源基因的引入和表达，为作物的生产与发展提供了新的思路。 本研究拟利用农杆菌介导基因转移技术，将耐旱耐盐基因codA导入李树基因组中，期望把李树的耐逆性和抗病虫害性能提高，为产业发展提供保障。 二、拟定研究目标： 1. 利用PCR技术构建含有codA基因的转化载体。 2. 将载体通过农杆菌介导转化法导入‘GF43’李中。 3. 筛选出含有codA基因的‘GF43’李，并鉴定转化效率。 4. 对转化后的‘GF43’李进行分子生物学和生理生化分析，验证codA基因导入‘GF43’李促进其耐逆性和抗病虫害性的有效性。 三、拟定研究步骤及方法： 1. PCR扩增codA基因：从海洋真菌Aspergillus nidulans中提取RNA，逆转录成cDNA，再进行PCR扩增codA基因。经鉴定后将其克隆至适当的表达载体中，使用限制酶切并进行测序鉴定。 2. 构建含有codA基因的转化载体：克隆含有codA基因的DNA片段到合适的表达载体中，再经限制酶切并进行测序鉴定。将构建好的含有codA基因的转化载体经外源DNA转移酶法转化大肠杆菌DH5α中进行扩增，经PCR检测，克隆一系列含有完整的codA基因的转化载体。 3. 利用农杆菌介导法将含有codA基因的载体导入GF43李中：利用农杆菌感染‘GF43’李，随机筛选克隆，并进行PCR检测和鉴定，筛选出含有codA基因的‘GF43’李。 4. 鉴定codA基因的转化效率：对转化后的‘GF43’李进行PCR、南方杂交等方法鉴定转化效率。 5. 分子生物学和生理生化分析：对转化后的‘GF43’李进行抗旱、抗盐、抗病虫害性状和氧化反应、膜脂过氧化、叶绿素荧光等指标测定，验证codA基因导入‘GF43’李促进其耐逆性和抗病虫害性的有效性。 四、预期研究结果： 通过本研究，可获得含有codA基因的‘GF43’李转化株，其转化效率达50%以上，转化效果良好。经过分子生物学和生理生化分析，证明codA基因导入‘GF43’李可明显提高其耐逆性和抗病虫害性能。该研究结果对于提高李树生产的经济效益、同时降低成本，具有重要的现实意义。