DB37_T 2271-2013番茄叶霉病诊断及检测技术标准.pdf

ICS 65. 020B 16DB37山東东省地方标准DB 37/T2271—2013番茄叶霉病诊断及检测技术标准The standard for diagnosis and prediction of tomato leaf mould2013-04-01发布2013-05-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，本标准由山东省农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：张修国、李壮、武琼。- DB37/T 2271—2013番茄叶霉病诊断及检测技术标准1范围本标准规定了番茄叶霉病诊断及检测技术。本标准适用于番茄叶霉病不同生有期症状描述，病菌分离培养及保存技术，病菌形态学描述，致病性测定技术，病害流行与气候因子关系分析，病菌分子检测技术。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1番茄叶莓病tomato leaf mould由真菌半知菌亚门褐孢霉（Fulviafulva（Cooke）Cif.）侵染所致，番茄叶霉病为设施番茄重要病害。该病害在番茄各生有期均严重发生，结果盛期危害最重，难以进行有有效防治，严重影响了番茄的产量与品质。2. 2病状symptom of a disease雷茄病部所显示的异常特性，如叶片褪色、病班、变软及腐烂等。2. 3病征symptom of a disease番茄病部病部出现病原菌子实体，如灰霉病菌丝体、褐色霉层、褐色霉状物等。2. 4接种悬浮液inoculum suspension用于番茄叶霉病接种含有定量接种体的液体。2. 5人工接种artificial inoculation在适宜条件下，通过人工操作将病菌接种体置于番适宜部位并使之发病的过程。2. 6致病性pathogenicity2 DB37/T原物所具有的破坏寄主和引起植物发生病变的能力，2. 7病情指数disease index（DI）病情指数（缩写为D1）又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数(DI）是根据一定数目的植株或植株器官各病级（把植株或植株某一器官感染病害轻重程度划分为等级称为病级）核计其发病株（器官）数所得平均发病程度的数值。3仪器及试剂带光源扩大镜、双目解剖镜(10x50x)、显微镜（100x～1000x)、震荡器、乳酚油、乳酚油配制：苯酚结晶（水浴加热溶化)20mlL、乳酸20mL、甘油40mL，蒸馏水20mL混合而成。4番茄叶霉病病状与病征见附录A。5番茄叶霉病病原诊断见附录A。6番茄叶霉病菌鉴定与致病性测定6. 1菌株分离鉴定将采集的番茄叶霉病标本于体视镜下挑取单个分生孢子于PDA或PCA平板培养基（见附求B)，25C28C下增养2周后，制片镜检和显微照相播透分生孢子梗和分生孢子特征，借助文献资料正确鉴定该病菌。菌株在PDA平板培养上充分培养后，移置于盛有无菌水的5mL冷凝管中4℃下保存。6.2病叶检查利用放大镜检查番茄叶叶片有无叶霉病可疑症状，叶片有无灰色霉层。6.3病原菌检验6.3.1直接镜检用挑针挑取病斑上霉状物制片镜检，显微镜观察有无病菌分生孢子梗和分生孢子，描述、记示分生孢子梗和分生孢子形态特征，必要时测量分生孢子梗和分生孢子的大小（见附永A）6.3.2洗涤检验将未发现叶霉病层的可疑番茄病斑及碎片，置250mL三角瓶内，加适量蒸馏水浸软，振荡器激烈震荡5min，洗下病斑表面病原物，将洗涤液倒进离心管，以1000r/min离心5min，去上层清3 DB37/T，取沉淀液置载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜检查有无番猫叶毒病菌的分生孢子梗和分生孢子，每批样品至少检查15个玻片。6.4致病性测定6.4.1接种体制备分离纯化获得的单孢菌株与PDA或PCA平板培养基上充分培养，然后加适量无菌水制备分生孢子浮液，另加适量无菌水稀释至适宜孢子浓度，利用血球记透板检测分生孢子浓度，调至分生孢子浓度为1×10°个/ml，接种备用。6.4.2接种期和接种浓度雷茄叶毒病适宜接种期为45叶期健康叶片，接种浓度约为5×10”个孢子/mL。6.4.3接种方法6.4.3.1番茄子叶点接法：用移液枪点接5×10°个孢子/mL分生孢子悬浮液于番茄子叶叶片正面中部，每子叶1滴，10μL/滴6.4.3.2番茄子叶喷雾法：用喉头喷雾器将5×10°个孢子/mL的分生孢子愁浮液均匀喷施于番猫子叶表面6.4.3.3番茄子叶贴菌丝块法：将番茄叶霉病菌分离后在PDA培养基上25℃预培养3d后，用灭菌打孔器（直径5.0mm）沿菌落边缘打取菌饼，将菌饼接种在番茄子叶中央。6.4.3.4上述各种方法接种后，将接种体置于温度