DB64 764_2012猪流感防制技术规范.pdf

ICS 65.020.30B 41DB64宁夏回族自治区地方标准DB 64/T 764—2012猪流感防制技术规范2012-03-20发布2012-03-20实施宁夏回族自治区质量技术监督局发布 DB64/ T 7642012本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。本标准由宁夏回族自治区农收厅提出并归口。本标准由宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心起草，本标准主要起草人：李知新、王进香、王晓亮、周海宁、杨春生、张玉玲、张成莲、吴亚文。1 DB64/ T 764—2012灭菌双燕水加至1000ml用时用灭菌双蒸水稀释使用B. 7. 3溴化乙锭（EB）溶液演化乙绽20ug灭菌双燕水加至 20al,B. 7. 4DEPC水超纯水100alL焦碳酸二乙酯(DEPC)50,室温过夜，121℃高压灭菌15min，2分装到1.5m1DEPC处理过的微量管。B, 8猪流感病毒H1N1亚型RT-PCR试验用引物B. 8.1反转录引物Uni12: 5′AGCAAAAGCAGG3′, 引物浓度为20pmo1/μLB. 8. 2PCR引物见下表，引物浓度均为20pmo1/μL。表B.1PCR过程中选择的引物引物名称引物序列长度 (bp)扩增目的片段MI684UCAAGACCAATCCTGTCACCTC684流感病毒M基因MI684LAAGACGATCAAGAATCCACAAB17620TATCAACAATAGAA762H1762LCAAACATCCAGAAGA日亚型绪流感疾毒用基因HI292UJCATTAATGATAAAGG292甲型HINI亚型流够病毒HA基H12921.TCCAGCATTTCTTTC因 DB64/ T 764—2012附录C（规范性附录）猪流感血凝抑制试验方法C.1适用范围此操作规程适用于猪流感抗体检测。C.2实验室条件C. 2. 196孔“V”型底微量板。C. 2. 2可调多通道移液器和单通道移液器及滴头。C. 2. 3水浴箱.C. 3试剂C. 3. 1标准病毒抗原。C. 3. 2待检血清。C. 3. 3红血球（0.5%鸡红细胞），C. 3. 4受体破坏酶（RDE)。C. 3. 5PBS或生理盐水，C. 4操作程序C. 4. 1RDE（霍乱滤液）处理标准参考血清C. 4. 1. 1用单通道移液器吸取1份血清放在EP管加入4份RDE液，混合。C. 4. 1. 237℃水浴过夜(18h)。C. 4. 1. 356C水浴加热30min，灭活RDEC. 4. 2HI试验操作过程C.4.2.1用微量加样器加PBS或生理盐水50μL于96孔微量血凝板的第1孔至第10孔，第11孔和第12孔分别留作4单位病毒液和血清对照，C.4.2.2于每行的第1孔中加入1:10稀释的经RDE处理过的待检血清50μL，混合均匀，吸取50μL至第2孔，依次倍比移释至第10孔，弃去50μL，C.4.2.3白第1孔至第11孔各加50uL4单位病毒液，第12孔加入50uL血清，混匀，室温静置15min。C. 4. 2. 4每孔中加入50μL的红血球（0.5%鸡红细胞），室温静置30min后观察结果。C. 5结果判定10 DB64/ T 7642012血凝被完全抑制的血清最大稀释倍数为血凝抑制试验的抗体效价。如为双份血清（间隔10d～21d），当第2次比第1次血清样品H滴度≥4倍，可判为猪流感病毒感染阳性。11 DB64/ T 7642012猪流感防制技术规范1范围本标准规定了猎流感防制技术的诊断方法、疫情报告、疫情处理、预防措施。本标准适用于猪流感的预防与控制。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程GB19489实验室生物安全通用要求NY/T682-2003备禽场场区设计技术规范NY/T768-2004高致病性禽流感人员防护技术规范《病原微生物实验室生物安全管理条例》（中华人民共和国国务院令，2004年第424号）DB64/T 7662012动物疫病应急流行病学调查技术规范3诊断方法3.1现场诊断3.1.1流行病学特点3.1.1.1传染源主要是病猪和带毒猪，主要通过鼻、咽途径进行传播，潜伏期几小对到数天，自然发病平均为4d。3.1.1.2猪流感多呈流行性，发病率可达100%，死亡率小于14.0%。无并发症时，大多数猪只可在3d~7d内康复。3.1.1.3感染流感病毒的人与猪接触后，易引发猪流感。3. 1. 2临床症状般情况下只有25%30%的感染猪出现典型的流感症状，多数呈亚临床表现。3.1.2.1突然发病，常见全群猪迅速