HY_T 176-2014海水中铁细菌的测定 MPN法.pdf

ICS_07.060; 13.060Z17HY中华人民共和国海洋行业标准HY/T 176—2014海水中铁细菌的测定MPN法Determination of iron bacteria in seawater—MPN method2014-06-25发布2014-12-01实施国家海洋局发布 HY/T 1762014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所提出。本标准由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC283)归口。本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所、浙江国华浙能发电有限公司负责起草，本标准主要起草人：牵亚红，张益、陈冲、吴彭杰、周举、张连涛、元吴、赵小芳、郭景静，- HY/T 1762014海水中铁细菌的测定MPN法范围本标准规定了毒水中铁细需的MPN测定方法本标准适用于海水及海水利用浓海水中铁细菌的测定。2观范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 16310.1—1996船舶散装运输被体化学品危害性评价规范水生生物急性毒性试验方法.术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1铁细菌iron bacteria一类能将溶于水中的棕色亚铁离子转变为不溶于水的竭色或黑色三氧化二铁水合物的细菌，3.2MPN法MPN(most probable number) method应用多管发醇技术，采用概率理论估算细菌浓度的方法。3.3陈海水aged seawater取自未污染海圾，装人玻璃瓶后储放在暗处15d以上的海水。方法原理本方法采用多管发技术，在(29±1）培养14d，如果试管中棕色清失面且形成褐色或黑色沉淀，表明阳性反应，采用MPN法对被测试样中的铁细菌进行计数。5试刻与材料本试验方中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB/T6682中三级水规格的水，试验所需试剂与材料如下：a)硫酸镁；b)硫酸铵；)磷酸氢二钾；d)无水氯化钙；1 HY/T 1762014e)硝酸钠；f)柠檬酸铁铵；g)殖代硫酸钠；h)陈海水；i)人工海水；按GB/T16310.1—1996配制；j)氢氧化钠溶减；160g/L；k)盐酸溶液：1+11；1) 牛皮纸.6仪器与设备6.1无菌箱(室)或超净工作台。6.2蒸汽压力灭菌器，6.3 生化培养箱：(29士1)℃。6.4电热干燥箱：温度控制范围60℃~280℃，允差±2℃。6.5电热恒温水浴锅：恒温范围37℃~100℃，允差±1℃。6.6天平：称量范围0g~220g感量0.01g。6.7冰箱。6.8振荡器。6.9刻度吸管或移液器：1mL、10mL，6.10量筒；500 mL,1000 mL,6.11烧杯，1000mL。6. 12无需试管：直径18mm，长度180mm，配硅胶塞，6.13无菌刻度吸管或移液器和Tip头。6.14无菌采样瓶：广口玻璃瓶或聚丙烯(PP)塑料瓶注：6.12~6.14中的式管、建胶富、刻度爱管或移液器和Tip头、采样惠均经蒸汽压力灭菌器(121土1)℃灭菌20min后，烘干冷却备用，6.15试管架，6.16pH计或精密pH试纸（6.4~8.0)，7试验前准备7,1培养基的配置7.1.1成分成分如下(每升中的含量）：a) 硫酸铁0.50 g1b)硫酸铵0.50 g1c)磷酸氢二钾0.50 g1d)无水氟化钙0,20 g1e)硝酸钠0.50 gf)柠蒙酸铁铵10.00 g.2 HY/T 176—20147,1.2制法将7.1.1a)~)试剂溶解到500mL海水和500mL蒸馈水配制的混合水中，用氢氧化钠溶液(160g/L)或盐酸溶减(1+11)调节pH至6.8±0.2,并分装在试管(6.12)中，每管5mL~10mL，用汽压力灭菌器（110士1)℃灭菌30min.冷却后备用。7.2无菌稀释水的制备将除海水或人工海水分装在试管(6.12)中，每管9mL.用蒸汽压力灭菌器(121士1)℃灭菌20min，冷却后备用。7.3硫代硫酸钠将硫代硫酸钠在无菌案箱（室）(6.1)内，并均匀地效在离紫外线灯的垂直距离30cm处灭菌30min备用，8分析检测8.1水样的采集8.1.1用灭菌采样瓶（6.14)采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部位受杂菌污染，瓶内要留有足够的空间，以备测定之前摇匀，8.1.2若采集的水样中有余氧，或在不能判断水样中是否有余氯的情况下，应在采样前，在无菌操作下，于灭菌采样瓶(6.14)中加人硫代硫酸钠(7.3)，加人量为每升水样约0.1g。若确定水样不含余氯，则无需加人硫代硫酸钠（7.3)。8.1.3水样