YC_T 472-2013烟草及烟草制品 微生物学检验 霉菌计数.pdf

ICS 65. 160YCX 87备案号：39853-—2013中华人民共和国烟草行业标准YC/T 472—2013烟草及烟草制品微生物学检验霉菌计数Tobacco and tobacco products--Microbiological examination-Enumeration of moulds2013-03-15 实施2013-02-28 发布国家烟草专卖局发布 YC/T 472—2013前言本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。本标准起草单位：上海烟草集团有限责任公司、安徽中烟工业有限责任公司、云南烟草科学研究院、郑州烟草研究院、红塔烟草(集团)有限责任公司、国家烟草质量监督检验中心、湖北中烟工业有限责任公司、中国烟草总公司青州烟草研究所。本标准主要起草人：林华清、臧大伟、沙云菲、姚忠达、米其利、奚家勤、马永凯、王浩军、吴风光、孔凡玉、黎根、张成省、苏杨、陈欢、王毅、吴达、天建华、舒俊生、楼佳颖、王亮、曾令杰、王嘉乐、唐兴宏。 YC/T 472--2013烟草及烟草制品微生物学检验霉菌计数1范围本标准规定了烟草及烟草制品微生物学检验的霉菌计数法。本标准适用于烟草及烟草制品的霉菌计数。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理根据霉菌生理特性，选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平板菌落计数法测定样品中霉菌数。4设备和材料4.1 分析天平:感量0.1g。4.2恒温培养箱:28℃±1℃。4.3 冰箱:2℃~5℃。4.4拍击式均质器。4.5加压蒸汽灭菌器：工作压力可达0.15 MPa。4.6超净工作台。4.7水浴锅:温度可达45℃～65℃,控温精度±1℃。4.8无菌玻璃三角瓶:250 mL、500 mL。4.9无菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度）、10 mL(具0.1 mL刻度）。4.10无菌平皿：直径90 mm。4.11无菌试管:18 mmX180 mm。4.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。4.133无菌均质袋。4.14无菌镊子、剪刀等。5 培养基和试剂配制培养基和无菌蒸馏水所用水均应符合GB/T6682中三级水规格。5.1改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基：成分及制法见附录A。 YC/T 472—20135.2无菌蒸馏水：蒸馏水分装后，121℃加压灭菌20min。6检验程序霉菌计数的检验程序见图1。检样烟草烟草制品剪戒小块25g样品均质袋+225mL无菌蒸馏水均质袋置于拍击式均质器中，处理3min*10倍系列稀释选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌平血内每Ⅲ中速加入约15mL改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基28℃±1培养5 d霉菌菌落计数报告均质速度为2;均质力度为标准。每处理30 s后均质袋换一方向，继续处理。图1霉菌计数的检验程序2 YC/T 472-20137 操作步骤7.1样品制备采样时应避免微生物的污染。样品采集后应尽快检验，否则应将样品置于低温干燥处。烟草样品：用无菌剪刀将样品剪成小块（约3cm×3cm），充分混合后称取25g样品置于无菌均质袋中。烟草制品（卷烟）样品：称取25g样品置于无菌均质袋中。7.2样品稀释样品匀液。7.2.2取1mL1：10稀释液(7.2.1)注人有9mL无菌蒸馏水(5.2)的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸，此液为1：100样品勾液。7.2.3按7.2.2制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一支1mL无菌吸管。7.2.4根据对样品霉变程度的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于两个无菌平皿内。同时，分别吸取1mL无菌蒸馏水（5.2）于两个无菌平皿中作空白对照。7.2.5快速将约15mL冷却至45℃的改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基(5.1)(可置于45℃±1℃恒温水浴锅保温)加人平Ⅲ皿中，并将平皿前后、左右轻轻地倾斜晃动或以顺时针和逆时针方向转动使培养基旋转均匀。7.3培养待培养基凝固后,将平板倒置于28℃士1℃恒温培养箱中,培养5d。7.4菌落计数在培养2d后，取出上述平板，选择霉菌菌落数在10CFU～150CFU范围内的各平板，用肉眼（必要时可用放大镜)计菌落数(计数时，可用记号笔在Ⅲ底点涂菌落，以防漏计或重复。若霉菌蔓延生长覆，盖整个平板的可记录为多不可计）。之后分别再培养3d和5d继续