核酸扩增技术-课件.pptVIP

定量PCR中扩增产物的检测方法 凝胶电泳： PCR-ELISA 荧光PCR法 由于荧光PCR可使用现代化仪器对PCR产物实行实时检测，很容易保证扩增在指数增长期内进行，是定量PCR扩增产物检测的一个发展方向。 第二节 荧光定量聚合酶链反应（Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction，FQ-PCR） 一、荧光定量PCR技术基本原理 二、荧光定量PCR技术 三、荧光定量PCR测定的数据处理 四、实时荧光定量 PCR技术的应用 荧光定量PCR技术基本原理 荧光扩增曲线图 Ct值 标准定量曲线 荧光扩增曲线图 荧光定量PCR：通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每个循环收集一个荧光强度信号，通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线. 扩增产物的检测及分析 凝胶电泳： 琼脂糖凝胶电泳法 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 PCR-限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP） 单链构型多态性分析法（PCR-SSCP） 核酸探针杂交法 PCR产物测序 琼脂糖凝胶电泳 制胶 加样 电泳 紫外光检测 特点： 分辨力高，长度仅相差1bp的DNA分子即可分开； 上样量远大于琼脂糖凝胶；