肠出血性大肠杆菌o157h7外膜蛋白a基因敲除菌株的构建及黏附作用研究.docxVIP

肠出血性大肠杆菌o157h7外膜蛋白a基因敲除菌株的构建及黏附作用研究 肠内疾病（ehs）o157h7是肠道疾病，主要通过污染的水源和食物传播。人体感染该菌后可引发腹泻、出血性结肠炎及溶血性尿毒综合征和血小板减少性紫癜等严重并发症。该菌主要定值于宿主肠道黏膜上皮细胞,使细胞发生黏附及擦拭性损伤(attaching and effacing lesions,AE lesion) 病原菌与宿主相互作用是决定其感染和发病的关键,而病原菌定植到宿主细胞表面是感染发生的首要步骤,病原菌表面的黏附分子在这一过程中发挥了关键作用。外膜蛋白A(outer membrane protein A Omp A)作为EHEC O157:H7一种主要的致病分子,在致病过程中发挥了重要作用。Omp A是大肠杆菌一种主要的外膜蛋白,在革兰氏阴性菌中是高度保守的,由325个氨基酸所组成,该蛋白主要由N端和C端两个结构域所组成 本文拟利用Red同源重组技术将EHEC O157H7 omp A进行敲除,同时构建了EHEC O157:H7 om p A回复突变菌株,并通过细胞黏附实验对野生型、敲出及回复突变菌株的黏附能力进行比较,为明确Omp A在EHEC O157∶H7致病中的作用提供实验证据。 1 材料和方法 1.1 胶回收试剂盒 0.1 cm电转杯购自Bio-Rad公司;胶回收试剂盒购自上海捷瑞生物技术有限公司