DB64 767_2012动物疫病样品采集技术规范.pdf

ICS 65. 020. 30B 41DB64宁夏回族自治区地方标准DB 64/T 7672012动物疫病样品采集技术规范2012-03-20发布2012-03-20实施宁夏回族自治区质量技术监督局发布 DB64/ T 7672012前言本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。本标准由宁夏回族自治区农牧厅提出并归口。本标准由宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心起草。本标准主要起草人：王晓亮、王进香、李知新、周海宁、周秀玲、吴顺祥、玉费萍、张学军。 DB64/ T 7672012动物疫病样品采集技术规范1范围本标准规定了动物疫病检验样品采集技术规范的术语和定义、样品采集原则、样品采集前的准备、样品采集、样品处理、样品的包装及废弃物处理、样品记录、样品保存、样品运送。本标准适用于动物疫病病原学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程GB/T18635-2002动物防疫基本术谱NY/T541-2002动物度弱实验室检验采样方法《兽医实验室生物安全技术管理规范》（中华人民共和国农业部公告2003年第302号）《病原微生物实验室生物安全管理条例》（中华人民共和国国务院令2004年第424号）《高致病性动物病原微生物菌（毒》种或者样本运输包装规范》（中华人民共和国农业部公告2005年第503号）3术语和定义GB/T18635-2002规定的以及下列术语和定义适用于本标准。采集通过一定的方法，按照特定的程序和要求，对样品进行收集、处理及整理的过程。样品采集原则4. 1遵循适时、典型、无菌、适量和生物统计的原则。4. 2发现疑似炭殖，不得解剖。4. 3根据不同的检验要求进行样品采集，包括相应的组织器官、内容物、分泌物、排泄物或其它材料。4. 4无法估计病因时，应对组织器官、分泌物和排泄物等进行全面的采集。4.5患高（禽）已死亡，应尽快采集样品，夏天不得超过6h，冬天不得超过24h。4.6采样应符合NY/T541-2002的规定，5样品采集前的准备5.1人员要求 DB64/T 7672012熟悉动物防疫的有关法律规定，其有一定的专业技术知识，熟练掌握采样工作程序和采样操作技术，采样时不得少于2人：5.2器具和试剂5.2.1容器具采样箱、保温箱或保温瓶、解剖刀、剪刀、锻子、酒精灯、酒精棉、碘酒棒、注射器、针头、试管架、塑料盒、铝盆、无菌棉拭子、胶布、封口膜、封条、冰袋、平Ⅲ、2.0mL塑料离心管、15mL离心管易封口样品袋、塑料包装袋等。5.2.2器材无菌处理金属器械可采用高压、干热、煮沸消毒30min。临用时75%酒精擦拭，或用时进行火焰消毒：器盟（玻制、陶制等）经103kPa高压30min，或160C干烤2h灭菌，或经0.5%～1%碳酸氢销溶液中煮沸10sin~15min，再用无菌纱布擦干，无菌保存各用。5.2.3试剂根据所采样品的种类和要求，准备不同类型的存放试剂，如PBS缓冲液、30%甘油缓冲波等。5.3记录和防护材料采样单、不干胶标签、圈珠笔、记号笔、记录本、口罩、一次性手套、乳胶手套、防护服、防护相、护目镜、胶鞋等。6样品采集#196.1.1采血部位6.1.1.1猪、牛、羊、马采用颈静肽、前腔静脉、耳静脉、尼静脉或颈外静脉、乳房静脉采血。6.1.1.2毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳嘟外静脉，多量采血可在隐静脉采集或划破趾垫0.5cB深度或剪断尾尖部采血。6.1.1.3瞻者类动物尾尖采血或眼案的血管丛采血。6.1.1.4免耳背静脉、颈静脉或心脏采血，6.1.1.5禽类翅静脉采血或心脏采血。6.1.2处理6.1.2.1全血样品中需加入抗凝剂，可用0.1%肝素钠或阿氏液或3.8%构腺酸钠，血液与抗凝剂应充分混合均匀。6. 1. 2. 2脱纤血在容器内加入适量小玻珠，加入血液后，反复振荡，待纤维蛋白凝固后，取脱纤血经密封后贴上标签，保持冷藏状态立即送实验室。6.1.2.3血清2 DB64/ T 7672012血液在室温下静置2h～4h，待血液凝固，置4℃冰箱过夜，分离血清，置-20C以下保存，遵免反复冻融。6.1.2.4血浆样晶中先加入抗凝剂，可用0.1%肝素钠或阿氏液或3.8%构橡酸销，与血液充分混合，静置，待红细胞自然下沉或高心沉淀后，轻轻吸取上层血聚。6.2皮肤样品有水滤或皮肤病变疾病的动物，直接从病变部位采集皮肤的碎屑或未破裂水泡液、水泡皮作为样品。6.3肠、肠内容物和类样6.3.1肠选择肠道病变最明显的部分，弃去肠内容物，用生理盐水