细胞工程课件.pptxVIP

细胞工程;;细胞工程（cell engineering）：通过细胞融合或拆合、核质交换或核移植、染色体或基因转移以及经由细胞培养和筛选，按照人们预先的设计，产生出新的细胞，用于生产、医疗或研发。 ;细胞工程概述;细胞工程概述;一、大规模细胞培养 ;一、大规模细胞培养 ;悬浮培养(suspension culture)：是指细胞在培养液中 呈悬浮状态的生长和增殖的培养方法。 适用范围： 血液及淋巴组织细胞； 无需贴壁生长的细胞系、肿瘤细胞； 骨髓瘤及杂交瘤细胞。;用途： 大量生产疫苗； 细胞因子； 某些特殊细胞的基因工程产物。;优点： 设备简单； 容积可选择性大； 成本低； 可连续收集细胞或其产物； 传代时无需消化； 细胞浓度均一，可调控； 细胞产量较恒定。;技术关键：不断震荡培养液以及连续进行气体交换。;2. 固定化培养 固定化培养：使细胞限制或定位于特定空间位 置的培养技术。 适用范围：所有动物细胞。;2. 固定化培养 系统： 吸附法：让细胞在适当的条件下贴附在载体表面、 中空纤维膜或培养容器表面。 包埋法：将细胞包埋于多聚物等海绵状基质中。 优点：细胞以较高密度在较小体积的培养液中生长， 培养液易于更换及分析。;填充式Nunc细胞工厂 ;中空纤维灌流;3. 微载体培养 微载体培养：让细胞吸附于微载体（microcarriers）表面进行生长与增殖的技术，也称微珠培养。 材料选择条件：对细胞没有毒性，能够承受高压灭菌，可重复利用。 ;3. 微载体培养 材料种类：交联葡聚糖、塑料基质、聚苯乙烯、明胶、玻璃介质、胶原或胶原涂层、纤维素、生物玻璃等。;4. 三维细胞培养 ;4. 三维细胞培养 ;二、细胞融合 ;二、细胞融合 ;3.杂交细胞的筛选方法 抗药性筛选： 常用HAT培养基 。;3.杂交细胞的筛选方法 ;4.细胞融合技术应用 细胞基础研究、细胞工程的重要工具， 如生产单克隆抗体。;三、细胞核移植 ;三、细胞核移植 ;克隆羊的产生过程;3.体细胞核移植的应用 细胞工程领域：同种、异种间的动物克隆。 同源克隆（homologous cloning）??将一个体的体细胞核植入同一个体的去核的卵母细胞中，将所获得的干细胞植入供核供体体内。;3.体细胞核移植的应用 细胞治疗价值： 治疗性克隆：从内细胞团取得细胞，扩增及定向诱导 分化后用于治疗某些特殊的疾病。 生殖性克隆：体细胞核移植后，任其发育直至产生一个新个体。 ;四、基因转移 ;2.转基因技术的步骤 外源目的基因的选择与获取； 将外源目的基因导入受体细胞； 对整合有目的基因的细胞进行筛选、扩增及鉴定； 若受体为卵细胞，则进行体外培育，并植入合适的动物子宫内； 筛选并获得转基因动物。;2.转基因技术的步骤;3.转基因的方法 物理法： 电穿孔法、显微注射法、裸DNA直接注射法等。 化学法： 磷酸钙共沉淀法、脂质体包埋法、 DEAE-葡聚糖法等。 生物法： 病毒介导法、体细胞核移植法、精子载体法、胚胎干细胞转染法等。 ;3.转基因的方法 ⑴ 磷酸钙介导的DNA转染 原理及基本过程：将氯化钙与外源DNA混合，加入到含磷酸根离子的溶液中，形成钙-磷酸-DNA共沉淀物，该沉淀物被培养的细胞摄取，DNA整合入细胞基因组中最终得到表达。 优点：操作简单，无需昂贵的设备。;3.转基因的方法 ⑵ 脂质体介导的转染 原理及基本过程：以一种多价阳离子脂质体作为载体，DNA可被脂质体包被形成复合物，该复合物可与培养细胞的细胞膜融合，DNA进入细胞，整合至受体细胞的基因组中并得以表达。 优点：转染成功率高、适应性广，细胞毒性较低。 缺点：比较昂贵，不利于大规模使用。;3.转基因的方法 ⑶ 电穿孔法 原理及基本过程：高浓度细胞悬液短暂地暴露于高电压时，DNA可通过高电压在细胞膜上所形成的小孔进入细胞，然后整合入细胞的基因组并得到表达。;3.转基因的方法 ⑶ 电穿孔法 适用范围： 对化学法转移不敏感的细胞； 悬浮细胞更适合。 缺点： 所需细胞及DNA数量多； 不同细胞间的最佳转染参数差异较大，需进行实验条件摸索。;3.转基因的方法 ⑷ 病毒转染法 原理：通过病毒感染的途径将外源目的基因 导入受体细胞。;3.转基因的方法 ⑷ 病毒转染法 常用方法：