GH_T 1109-2015蜂蜜中丙酮醛含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.180.10GHX 31备案号：49399—2015中华人民共和国供销合作行业标准GH/T 1109--2015蜂蜜中丙酮醛含量的测定高效液相色谱法Determination of methylglyoxal in honeyHigh performance liguid chromatography2015-03-27 发布2015-06-01实施中华全国供销合作总社发布 GH/T 1109—2015前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T 20001.4—2001给出的规则起草。本标准由全国蜂产品标准化工作组提出。本标准由中华全国供销合作总社归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈磊、沈伟健、赵炜、栾军、马丽、吴斌、张睿、沈崇钰、杨雯签、袁娟、陈惠兰、刘善菁。 GH/T 1109—2015蜂蜜中丙酮醛含量的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了蜂蜜中丙酮醛的高效液相色谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中丙酮醛含量的测定。本标准丙酮醛的检测低限为20 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理蜂蜜样品用水溶解后，与邻苯二胺进行衍生化反应，用高效液相色谱进行测定，用外标法定量。4试剂和材料实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规定要求。4.1乙腈:C,H;N,色谱纯。4.2E甲酸:CH2O2，色谱纯。4.3丙酮醛标准品:CH4O2，40 g/100 g水溶液(CAS:78-98-8)。4.4 邻苯二胺:C.H.Nz，分析纯。4.50.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸(4.2)置于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成0.1%甲酸水溶液。4.6衍生化试剂：称取邻苯二胺(4.4)0.6g(精确至0.01g)置于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成6g/L的邻苯二胺水溶液，用于衍生化反应。4.7标准储备液：精密称取丙酮醛标准品（4.3)100 mg（精确至0.01 mg)置于10 mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，配制成4g/L的标准储备液。再准确吸取4g/L的标准储备液100μL于10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，得40 mg/L的标准储备液。两种浓度的标准储备液均置于 4 ℃冰箱保存。4.8标准工作溶液：临用前吸取适量 40 mg/L和 4 g/L标准储备液（4.7），用水稀释成浓度为2.0 mg/L、4.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、100.0 mg/L的丙酮醛水溶液,现配现用。4.9滤膜:有机相0.22 μm。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。1 GH/T 1109—20155.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g5.3涡旋仪。6样品的保存取蜂蜜代表样品装入洁净容器内，密封，标明标记，于室温避光保存。7 试验方法7.1供试样品溶液的制备称取1g(精确至0.01g)蜂蜜溶于 10 mL水中，取 0.5mL该蜂密水溶液与 0.5 mL衍生化试剂（4.6)混勾，在室温、避光条件下进行衍生化反应8h以上，过0.22μm有机滤膜后进样分析。7.2色谱条件色谱柱：C18，柱长150 mm，内径4.6 mm，填料粒径5μm;或性能相当的色谱柱；流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（3：7，体积比），等度洗脱；流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长：318 nm;进样量：10μL。7.3高效液相色谱测定丙酮醛标准工作溶液（4.8)在高效液相色谱设定条件下分别进样，以丙酮醛衍生化产物的色谱峰面积为纵坐标、工作溶液浓度（mg/L)为横坐标，绘制6个浓度点的标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中丙酮醛衍生化产物的响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，丙酮醛标准品衍生物以及基质加标样品的色谱图见附录A中的图A.1。7.4空白试验除不称取试样外，均按上述步骤(7.1~7.3)进行。7.5结果计算结果按式(1)计算：:(1)式中:X:试样中丙酮醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C:由标准曲线计算所得样液中丙酮醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；CoiV试样最终定容体积，单位为升（L）；f一稀释倍数，本实验方法为20；-样品质量，单位为千克（kg）。m2 GH/T 1109—2015回收率和精密度丙酮醛回收率和精密度数据见附录 B中的表B.1。3 GH/T 1109-2015附录A(资料性附录)丙酮醛标准品衍生物以及基质加标样品的色谱图mAU,140120标准品10