SN_T 4044-2014出口肉及肉制品中假单胞菌属的计数方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4044-—2014出口肉及肉制品中假单胞菌属的计数方法Enumeration of presumptive Pseudomonas sppin meat and meat products for export2015-05-01实施2014-11-19 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局1站话400698231、刮涂层查真伪 SN/T 4044—2014前#言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局本标准主要起草人：杨向莹、李辑、杨娜、徐超、张子宏、刘朝晖。I SN/T 4044—2014出口肉及肉制品中假单胞菌属的计数方法1 范围本标准规定了肉及肉制品中假单胞菌属（Pseudomonas spp.)计数的方法。本标准适用于肉及肉制品中假单胞菌属的计数。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1假单胞菌属Pseudomonas spp.在本标准规定的检验条件下,在CFC琼脂平板上形成氧化酶阳性菌落的细菌。3设备和材料灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅和干热灭菌箱。3.133.2恒温培养箱：25℃士1℃。3.3恒温水浴箱：47℃±2℃。3.4天平：感量0.01 g。3.5均质器。3.6无菌吸管：1mL（具0.1ml刻度）或微量移液器及无菌吸头。3.7无菌锥形瓶：容量100mL、250ml。3.8无菌培养Ⅲl:直径90 mm。3.9无菌试管。3.10 pH计。3.11无菌涂布棒。3.12无菌接种环。4培养基和试剂CFC琼脂，见 A.1。4.14.2氧化酶试剂：见A.2。5检验程序检验程序见图1。1 SN/T 4044--2014检样25g样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2～3个适宜稀释度的样品匀液各取0.1 mL接种 CFC平板,涂布均匀25℃±1℃44 h±4 h计数菌落氧化酶试验确证报告结果图1假单胞菌属计数方法检验程序6操作步骤6.1样品匀液的制备6.1.1以无菌操作称取25g样品，置于盛有225mL灭菌生理盐水的无菌均质杯中，于8000r/min~10 000 r/min 均质 1min～2 min，制成1：10 的样品勾液;或于装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1：10 的样品匀液，6.1.2若需配制1：100样品勾液,可取1：10样品匀液1mL加人盛有9mL灭菌生理盐水的灭菌试管中，混匀。更高稀释度的样品匀液可按此方法操作。6.2　接种和培养6.2.1根据对样品污染程度的估计,选择 2～3个合适的稀释度,每个稀释度接种 2 个 CFC琼脂平板。6.2.2用移液管或移液器吸取0.1mI初始样品匀液于CFC琼脂平板上。对随后的连续稀释度的样品匀液重复上述操作，每个稀释度换-支无菌吸管或无菌吸头。2 SN/T 4044--20146.2.3用无菌涂布棒将琼脂平板表面的样液涂布开，直到琼脂平板表面完全干燥。6.2.4将涂布完的平板倒置于培养箱中,25℃士1℃,培养 44h士4h。6.3菌落计数培养后，计数每个平板上的菌落数，选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，从这些平板上任意挑选5个菌落进行确证。6.4确证试验用氧化酶试剂湿润滤纸，用铂铱合金或塑料接种环（用镍铬合金接种环会产生假阳性），挑取菌落涂于滤纸条上。如果滤纸在10s之内变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验阳性，如果30s后仍无颜色变化为氧化酶试验阴性。氧化酶试验阳性的菌落为假单胞菌属菌落。7 结果计算7.1只有一个稀释度在适宜计数范围内时,经确证为假单胞菌属的菌落数比例乘以6.3中计数的平均菌落数,再乘以稀释倍数,除以接种量计算。示例：1：100样品稀释液0.1mL，在CFC平板上有100个菌落，挑取5个菌落进行氧化酶试验确证，有4个菌落为氧化酶试验阳性，则该样品中假单胞菌属菌数为：（100×4/5×10²）÷0.1=8.0×10*（CFU/g）。7.2若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式(1)计算：≥C(1)Nv(ni +0. 1nz)d式中:N样品中假单胞菌属菌数；一连续两个稀释度平板上经确认为假单胞菌属的菌落数之和；C是每平皿的接种量，单位为毫升（mL）；适宜范围假单胞菌属菌落数的第一稀释度（低)平板个数；n1适宜范围假单胞菌属菌落数的第一稀释度(高)平板个数;n2稀释因子（适宜范围内假单胞菌属菌落数的第一稀释度）。d示例：1:10001: 100稀释度18,16110,120假单胞菌属菌落数ZCN =(n.+0. 1n2)d=(110+120+18+16)/[0.1×(2+0.1X2)×10-2=120 000或1