NEB产品知识和市场培训教材.pptx

NEB 产品知识和市场培训 2001年8月市场与技术支持部第一部分 NEB厂家背景回顾美国总部： Beverly, MA支柱产品——工具酶先进的基因克隆和高表达体系的构建技术120种自主开发的酶60多种酶是由NEB首先筛选到并进入商品化生产1975~2001二十五年的生产历史国际化的生产和营销网络 在全世界35个国家和地区有分销商 美国、英国、德国、加拿大四个生产基地专业水准的厂商 发酵中心——生产部 酶制备和DNA重组技术中心——研发部 分子生物学和寄生虫学研究中心——基础研究院第二部分 NEB 产品讲解核酸工具酶 DNA限制性内切酶 DNA聚合酶、逆转录酶 Vent系列的PCR聚合酶 DNA/RNA修饰酶DNA限制性内切酶单位的定义 在50?l反应体系中，1小时内，完全消化1?g的DNA所 需要的酶量为1 Unit 包装与规格 常用酶大多数为10 U/?l 缓 冲 液 4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液 稀 释 液 分为A、B、C三种，依表询 储 藏 条 件 在不被稀释的情况下，可长期存放在 零下20度长达20之久DNA限制性内切酶严格的质量检验：非特异性的内切酶活性检测核酸酶污染检测外切酶污染检测蓝白斑筛选检测针对于常用在克隆实验中的酶检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏DNA限制性内切酶目录书中出现的标志符号的含义NEB自主克隆的酶基因从重组菌株中提纯的酶随酶另附一管BSA酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动酶是否耐热经过蓝白斑法检测最佳的工具酶反应温度酶所对应的缓冲液编号DNA限制性内切酶小常识：Homing 核酸内切酶识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶 同裂酶的概念识别同一酶切位点的一组内切酶 BSA的作用酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性DNA限制性内切酶NEB限制性内切酶的卖点：种类非常齐全，（丰富的稀有酶）稳定性好，存放时间长价格在进口酶类里适中质量可靠DNA/RNA聚合酶特 性：以单链DNA或RNA为模板，从5’端向3’端合成新链DNA或RNA的探针标记3’末端和5’末端的补平3’末端的碱基置换DNA测序反应、定点突变和转录3’末端突出的切平应 用DNA/RNA聚合酶常用的种类：E.coli DNA Polymerase IKlenow Fragment （3’—5’ exo-）T4 DNA PolymeraseTerminal TransferaseM-MuLV Reverse Transcriptase*M-MuLVReverse Transcriptase（RNase H-） T7/Sp6 RNA Polymerase性能指标：5’端向3’端的外切活性3’端向5’端的外切活性聚合速度错配率耐热性延伸能力NEB Vent系列聚合酶Vent DNA Polymerase 主要应用：常规PCR扩增 双脱氧法测序NEB Vent系列聚合酶Vent DNA Polymerase卖点：高保真耐热性非常好与常规Taq酶的错配率比较DNA/RNA 修饰酶DNA / RNA Modifying Enzyme连接酶 …………………………Ligase激酶 ……………………………Kinase碱性磷酸酶 ……………………PhosphataseBeta琼脂糖酶 …………………Agarase甲基化酶 ………………………Methylase核酸酶 …………………………Nuclease外切酶 …………………………Exonulease内切酶 …………………………EndonuleaserecA重组蛋白酶………………recA ProteinDNA/RNA 修饰酶重点产品： T4 DNA Ligase 单位定义：20000 NEB Unit = 300 Weiss Unit 4000 NEB Unit = 60 Weiss Unit T4 Polynucleotide Kinase （T4 PNK） 对DNA5’末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆 Alkaline Phosphatase, Calf Intesinal （CIP） 去除DNA 5‘和3’的磷酸基团，用于制备5‘的置换 标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。分子量标准 DNA分子量标准NEW2-log DNA Ladder常用类型：整数分子量的 Marker1kb DNA Ladder100bp DNA Ladder DNA分子量标准噬菌体DNA和质粒DNA 酶消化型的DNA分子量标准 非整数型的 DNA分子量标准PGF 分子量标准DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装用于几十kb至上千kb的DNA分离时的Marker脉冲电泳分离 分子量种类：Low RangeMidRangeLambda LadderYeast Chro