SN_T 1151.2-2011对虾白斑病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1151.2—2011代替 SN/T 1151.2—2002,SN/T 1151.6-2004对虾白斑病检疫技术规范Quarantine protocol for white spot disease2011-05-31 发布2011-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1151.2—2011前言SN/T1151系列标准共分为六部分：虾桃拉综合征检疫技术规范-对虾白斑病检疫技术规范斑节对虾杆状病毒(MBV)诊断方法-虾黄头病检疫技术规范-对虾杆状病毒(BP)检验方法-对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程本部分为SN/T1151的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分代替 SN/T 1151.2-2002《对虾白斑病毒（WSV）聚合酶链式反应（PCR）检测方法》和SN/T1151.62004《对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程》。本标准与 SN/T1151.2—2002和SN/T 1151.6-—2004相比，主要技术变化如下：增加了临床症状和综合判定方法。本部分主要参考世界动物卫生组织（OIE)《水生动物疾病诊断手册》(2009版)中2.2.5章。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中国水产科学研究院黄海水产研究所、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：何俊强、刘、黄健、杨冰、雷质文、岳志芹、高隆英、江育林、史秀杰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1151.2-2002;SN/T 1151.6-2004。 SN/T 1151.2—2011对虾白斑病检疫技术规范1范围SN/T 1151 的本部分规定了对虾白斑病的 PCR、斑点杂交和原位杂交等检测方法。本部分适用于对虾白斑病的流行病学调查、监测、诊断和检疫。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出人境动物检疫采样3缩略语下列缩略语适用于本文件WSD(white spot disease):对虾白斑病WSV(white spot virus):对虾白斑病毒PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应NBT(nitroblue tetrazolium):氮蓝四唑BCIP(5-bromo-4chloro-3-indoyl）:5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸-甲苯胺盐DMF(dimethylformamide):二甲基甲酰胺4概述WSD是由 WSV引起的一种对虾传染性疾病,是全世界养殖对虾中危害最为严重的对虾病毒病，已被列人世界动物卫生组织(OIE)水生动物疫病名录，同时被我国列入一类动物疫病名录。病毒粒子从杆状到椭圆状,带有三层囊膜,粒子较大(80 nm～120 nm×250 nm～380 nm)。基因组大小为 290 kb。感染细胞肥大的核内能产生 WSV特征性的包涵体。5试剂材料及仪器设备本标准所用试剂如无特殊说明均为分析纯试剂。试验用水符合 GB/T 6682一级水的要求。5.1Taq酶：一20℃保存,避免反复冻融或温度剧烈变化。5.2 dNTP:dCTP、dGTP、dATP、dTTP 各 10 mmoL/L。5.3引物：两对引物浓度为 40 μmoL/L,其序列分别为：146F1:5-ACT ACT AAC TTC AGC CTA TCT AG-3146R1:5-TAA TGC GGG TGT AAT GTT CTT ACG A-3 SN/T 1151.2-2011146F2:5-GTA ACT GCC CCT TCC ATC TCC A-3146R2:5-TAC GGC AGC TGC TGC ACC TTG T-35.4乙醇：预冷的无水乙醇于一20℃保存,不需预冷的无水乙醇于常温保存。5.5DIG标记的核酸探针：按照国家发明专利ZL111336.4和实用新型专利ZL215068.9（专利权人为中国水产科学研究院黄海水产研究所)所提供的技术制备。5.6SEMP-tris研磨液：按照国家发明专利ZL111336.4和实用新型专利ZL.215068.9（专利权人为中国水产科学研究院黄海水产研究所)所提供的技术制备。5.7 其他试剂:碱性磷酸酶标记的 DIG抗体(0.75 U/μL)、NBT、BCIP、DMF、二甲苯、中性树胶。5.8 PCR扩增仪。5.9电泳仪。5.10凝胶成像仪。5.11程控石蜡切片机或常规手二切片可切5μm～7um厚的石蜡组