SN_T 3609-2013进出口化妆品中欧前胡素和异欧前胡素的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3609-—2013进出口化妆品中欧前胡素和异欧前胡素的测定‧液相色谱-质谱/质谱法Determination of imperatorin and isoimperatorin in cosmetics forimport and export--LC/MS/MS Method2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3609—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈捷、徐娟。I SN/T 3609-2013进出口化妆品中欧前胡素和异欧前胡素的测定液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了进出口化妆品中欧前胡素和异欧前胡素的液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。本标准适用于化妆品中欧前胡素和异欧前胡素含量的测定欧前胡素和异欧前胡素的测定低限均为0.5mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中欧前胡素和异欧前胡素采用甲醇提取冷冻净化，上清液稀释后，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。4试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1 甲醇。4.2醋酸氨:分析纯。4.3欧前胡素和异欧前胡素标准品：-欧前胡素（imperatorin）：AS号：482-44-0，相对分子质量：270.28，分子式：C1H14O4，纯度:98%。-异欧前胡素（isoimperatorin）：CAS号：482-45-1，相对分子质量：270.29，分子式：C16H14O4，纯度:98%。4.4乙酸氨溶液（1mol/L）：称取77.08g乙酸氨，用水定容至1000mL。4.5甲醇+10 mmol乙酸氨:1L甲醇中加人10 mL1 mol/L乙酸氨水溶液。4.6乙酸氮溶液（5mmol/L)：称取0.3854g乙酸氨，用水定容至1000mL。4.7甲醇-水（80+20，体积比）：量取80ml甲醇，加人20mL水，混匀备用。4.8标准储备液：分别准确称取适量的欧前胡素和异欧前胡素标准物质，用甲醇分别配制成浓度为1000μg/ml.的标准储备液，在一18℃避光存放，保存期1年。4.9标准中间溶液：分别吸取欧前胡素和异欧前胡素贮备溶液各1.0mL，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容至100mL得到浓度为10.0μg/mL的混合标准中间溶液,在一18℃避光存放，保存期1年。4.10标准工作液：将标准中间溶液（4.9)用甲醇逐级稀释为标准工作溶液，浓度在0.25ng/mL～20 ng/ml范围内，现配现用。1 SN/T 3609---20135仪器和设备5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量为 0.1 mg和0.01 mg。5.3涡旋振荡器5.4水浴超声波发生装置。5.5低温高速离心机（最大转速10000r/min）。5.6高速离心机（最大转速15000r/min）。5.7具塞塑料离心管：50ml6测定步骤6.1提取称取试样1g（精确至0.00lg)至50ml离心管中,加10.0ml.甲醇（4.1），涡旋振荡2min.45℃水浴超声30min，一4℃下，4500r/min离心10min，分离上清液于具塞离心管.待净化。6.2　净化将上清液置于18℃下冷冻2h后，在冷冻状态下，快速吸取冷冻清液于具塞试管中，恢复至室温后，用刻度移液管准确吸取2.5mL，置于刻度比色管中，用甲醇-水（4.7)定容到5.0ml，摇匀.稀释液在12000r/min下，离心5min，上清液过0.2μm滤膜，收集滤液于具塞试管，再吸取滤液100μl，置于刻度比色管中，用甲醇-水定容到10.0mL，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。6.3测定6.3.1液相色谱条件液相色谱条件如下：a）色谱柱:Waters SunFireTM Cig柱,3.5 μm,10 cmX2.1 mm(内径),或相当者;流动相：乙酸氨甲醇溶液（4.5)-乙酸氨水溶液（4.6）=80+20（体积比）；b）流速:0.25 mL/min;c）d）柱温:40℃；e）进样量:10 μL。6.3.2质谱条件质谱条件如下：a）离子源：电喷雾离子源（ESI);b）扫描方式：正离子扫描；c）监测模式:多反应监测（MRM);雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏d）度达到检测要求，