SN_T 3177-2012针叶松黑根病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3177—2012针叶松黑根病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Ophiostoma wagener(Goheen Cobb)Harrington2012-11-16 实施2012-05-07 发布中华人民共和国发布3国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 3177--2012前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：罗加凤、廖芳、刘跃庭、张裕君。1 SN/T 3177--2012针叶松黑根病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了针叶松黑根病菌EOphiostoma wageneri（Goheen Cobb)Harrington]（参见附录A)症状检查、分离培养的实验步骤和实验鉴定方法等。本标准适用于针叶松黑根病菌相关寄主(苗木、原木或木制品)中针叶松黑根病菌的检测、分离培养和鉴定。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件2. 1管胞tracheid木质部内具有输导和支持功能，两端楔形尖锐，壁加厚的管状细胞。2. 2具缘纹孔bordered-pit松木管胞细胞壁增厚的过程中，未被增厚的区域形成的个孔道2.3茎向切面radial section经过树干中心，平行于树干的切面。2. 4切向（侧切)切面tangential section不经过树干中心，平行于树干的初面。2.5横切面transverse section经过树干中心，垂直于树干的切面，3针叶松黑根病菌基本信息学名:Ophiostoma wageneri(Goheen . Cobb)Harrington异名:Ceratocystis wageneri Goheen Cobb 和 Grosmannia wageneri(Goheen . Cobb)Zipfel,Z. W. de Beer . M. J. Wingf. ,comb. nov.无性世代学名:Leptographium wageneri(W.B.Kendr.)M. J.Wingf.无性世代异名:Verticiladiella wageneri W.B. Kendr.中文名称：针叶松黑根病菌英文名:Black stain root disease分类地位：针叶松黑根病菌属真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），核菌纲（Pyrenomycetes），球壳目（Sphaeriales)，长喙壳科(Ophiostomataceae)，长喙(蛇口)壳属（Ophiostoma Sydow .Sydow)。无性世代为薄粘束梗霉属（Leptographium），根据寄主的不同分为 3个变种 L.ageneri var. SN/T 3177-2012wageneri,L. wageneri var ponderosum,L. wageneri var. pseudotsugae. 4　方法原理病原菌在寄主植株上的症状特点、病菌形态学特征（参见附录B)及其寄主范围（参见附录A)作为针叶松黑根病菌的检疫鉴定依据。5器材、试剂和培养基5.1器材斧子、锯子、放大镜、灭菌培养血（直径9cm）、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、解剖刀、酒精灯、标签、载玻片、盖玻片等。体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平（感量0.01g）、高压灭菌锅。5.2试剂和培养基马铃薯、葡萄糖、琼脂、放线菌酮（化学名称：环已酰亚胺cycloheximidc）、链霍素、1.0%次氯酸钠（NaCIO）、无菌水、酒精。马铃薯培养基（PDA）,PDA选择性培养基（参见附录C）。6现场检测在光线充足的场所，用锯子或斧子将抽取的原木、板材或苗木的根部和茎杆进行横切、茎切和侧切。观察茎切切面和侧切切面是否有黑色条状病斑（参见图B.1），横切切面是否有黑色新月形环状病斑（参见图B.2），有树皮的样品须剥开树皮，仔细检查有无小虫和象鼻虫以及昆虫蛀食虫道。有症状的原木用电锯取长约20cm～30cm的木块段连同所有可疑昆虫样品送往实验室作进一步检验。7检验方法7.1直接镜检切向撕下木质部变色组织，或用切片机切片，选取组织薄片显微镜检，观测菌丝体在寄主组织内的着生情况。用体视解剖镜仔细检查虫体表面和虫道内有无黑褐色病菌分生孢子梗和子囊壳，挑取可疑黑色分生孢子梗或子囊壳制片，显微镜镜检，详细记录分生孢子梗、分生孢子、子囊壳、子囊、子囊孢子形态特征，并测定其大小。7.2分离培养用解刀切向剥下黑色病变木材组织，剪成0.4cm×0.4cm小片，用棉纱包好，在1.0