NY 802-2004乳与乳制品中淀粉的测定 酶-比色法.pdf

ICS 67.050X 04中华人民共和国农业行业标准NY/T 8022004乳与乳制品中淀粉的测定酶一比色法Method for determination of starch in raw milk anddairy food Enzyme- colorimetric method2004-04-16 发布2004-06-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 802—2004前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位：农业部乳品质量监督检验测试中心、农业部食品质量监督检验测试中心（上海）、农业部食品质量监督检验测试中心（佳木斯)和农业部食品质量监督检验测试中心(石河子）)。本标准主要起草人：王金华、张宗城、刘宁、薛刚、钱莉、王南云、罗小玲、朱建新、牛兆红。 NY/T 802—2004乳与乳制品中淀粉的测定酶一比色法1 范围本标准规定了用酶一比色法测定乳与乳制品中淀粉的方法。本标准适用于乳与乳制品中淀粉的测定。本标准方法检出限为0.11g。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB6682分析实验室用水规格和试验方法3原理淀粉在淀粉葡萄糖苷酶(AGS)催化下,水解为葡萄糖。葡葡糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化氧化葡萄糖,生成葡萄糖酸和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化,过氧化氢与4-氨基安替吡啉和苯酚生成红色醒亚胺。在505 nm波长测定醒亚胺的吸光度与标准系列比较定量。ACS nC-Hi206(CHioOs)n + nH20-GODCH12O% + O2CH10 O + H2O2H2O, + CH,OH+ CIHi3 N;O PDCH,NO+ H2O4 试剂以下酶制剂为生化纯，化学试剂为分析纯，用水应符含GB6682中一级水的规格或相当纯度的水。4.1淀粉葡萄糖苷酶(amyloglucosidase)溶液称取1.920g-水柠檬酸(C.HgO,·H,O)、7.415g二水柠檬酸三钠(C,H;OhNa32H2O)和相当于100u(活力单位)质量的淀粉葡葡糖苷酶,加水溶于100mL容量瓶中，定容，pH4.6。在4℃左右保存，有效期1个月。4.2葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)过氧化物酶(辣根,peroxidase)溶液称取1.300g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）、4.739g十二水磷酸氢二钠(Naz2HPO4·12HO),相当400u(活力单位)质量的葡萄糖氧化酶和1000u(活力单位)质量的过氧化物酶，加水溶于100mL容最瓶中定容,pH7.0,在 4℃左右保存,有效期1个月。4.30.00154mol/L4-氨基安替吡啉溶液称取0.0313g 4-氮基安替吡啉(CrHi3N3O)溶于100mL水中。4.40.022mol/l.苯酚溶液称取 0.020 7 g苯酚(CgHOH)溶于 100 mL水中。4.5 二甲基亚砜[(CH3)2SO]4.66 mol/L盐酸溶液1 NY/T 802--2004将 12 mol/L盐酸(HCI)与等体积水混合,摇匀。4.76 mol/L氢氧化钠溶液称取24g氢氧化钠(NaOH),溶于100 mL水中,摇匀。4.8淀粉标准溶液称取经100℃±2℃干燥2h的可溶性淀粉[(CHlo0)0.200g,精确至0.0001g,溶于少量60℃水中,冷却后定容至 100 mL,摇匀。将此溶液用水稀释 V10.00V100.0,即 200 μg/mL淀粉标准溶液。5仪器5.1恒温水浴锅精确至 1℃。5.2可见光分光光度计505 nmo5.3酸度计5.4微量移液器精度0.01 mL。6试料的制备用 100 mL三角瓶称取样品 0.5g～1.5g,精确至 0.000 1 g,加 20 mL二甲基亚砜和6 mol/L盐酸溶液5mL,于60 ℃ ±1 ℃恒温水浴锅恒温 30 min(每隔 5 min摇动一次)。冷却至空温后,用6 mol/L氢氧化钠溶液和酸度计调整pH至4.6。将溶液转移到250mL容量瓶中，用水定容,摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液30 mL,即为试料。试料中淀粉含量高于1000μg/mL时，可适当增加定容体积。7 分析步骤7.1 标准曲线的绘制用微量移液器吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL淀粉标准溶液，分别置于10mL容量瓶中，各加人1mL淀粉葡萄糖苷酶溶液，摇匀，于60℃±1℃恒温水浴锅中恒温20min;冷却至室温,加人1.5mL葡萄糖氧化酶一过氧化物酶溶液、1.5mL 4-氨