SN_T 3503-2013莱克多巴胺纳米磁快速检测方法 试纸法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3503---2013莱克多巴胺纳米磁快速检测方法试纸法Rapid screen of ractopamine residues with nano magnetic particles- Immunechromatographic assay2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准莱克多巴胺纳米磁快速检测方法试纸法SN/T 3503--2013*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013)北京市西城区三里河北街16号（100015）总编室：（010址 www. spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×123001/16印张 0.5字数 10 千字2013年8月第版2013年8月第一次印刷印数 1—1600*书号：155066·2-25828 SN/T 3503--2013前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不应承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、清华大学深圳研究生院、深圳市外来有害生物质检测技术研发重点实验室。本标准主要起草人：卢体康、秦智锋、孙洁、马岚、林庆燕、吕建强、杨俊兴、袁航、刘建利、廖立珊、陈兵张彩虹、陶虹、花群义、陈书、曾少灵、曹琛福、峰、阮周曦、宗卉。 SN/T 3503—2013莱克多巴胺纳米磁快速检测方法试纸法1 范围本标准规定了采用纳米磁免疫层析法，对动物源性食品、饲料和尿液中的莱克多巴胺残留进行快速筛选检测。本标准适用于动物源性食品、饲料和尿液等样品中莱克多巴胺残留快速筛选定性检测。本标准检测下限为0.1 μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T18088出人境动物检疫采样SN/T2123出人境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范3原理本方法是免疫层析法中的竞争抑制法，其主要原理是：通过将牛血清白蛋白偶联莱克多巴胺抗原、抗鼠IgG抗体、纳米超顺磁标记的抗莱克多巴胺抗体和其他试剂固着在硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜等纸膜材上制成检测试纸，应用层析式竞争法原理检测样品中的莱克多巴胺残留。样品中的莱克多巴胺在流动的过程中与玻璃纤维素膜上纳米磁珠标记的特异性抗莱克多巴胺抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上牛血清白蛋白-莱克多巴胺抗原偶联物的结合，使检测线上结合的纳米磁珠的量减少，使用超顺磁共振检测仪测定得到的磁共振信号强度与样品中的莱克多巴胺含量成反比。4试剂与仪器4.1试剂4.1.1试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合GB/T6682规定的二级水，所用化学试剂均为分析纯。4.1.2莱克多巴胺纳米磁免疫层析快速检测试纸。4.1.3冲洗液（配方见附录 A的A.1）。4.1.4 甲醇。4.1.5 乙酸乙酯。4.1.6 氨水。4.1.7多氨化甲醇溶液（配方见A.2）。1 SN/T 3503—20134.1.8pH7.4 0.02 mol/I PBS溶液(配方见 A.3)。μg/L莱克多巴胺阳性标准品溶液（配方见A.4），置于4℃，可保存3个月。4.1.10莱克多巴胺阴性对照：不含有莱克多巴胺残留且经气相-液相-液相（LC/MS/MS)仪器确证为阴性的尿液、肌肉、组织或血液样本。4. 1. 11空白对照：冲洗液。4. 2仪器4. 2. 1超顺磁共振检测仪。4.2.2离心机。4.2.3涡旋式混合器。4.2.4匀浆器。4.2.5微量移液器：50μl、100μL和1000l单通道移液器。5样品采集、运输与保存5.1　样品的采集样品的采集、保存及运输应符合GB/T14699.1:GB/T18088.和SN/T2123的相关采样要求。5.2样品的运输与保存饲料样品可于常温运输，其余样品应置于低温密封的等器内运输2℃～8℃保存不应超过24h。6　样品制备6.1 肌肉、肝脏制样称取肌肉或肝脏2.0g，于匀器中充分匀浆，人oml争，漏旋振荡 10 min，4 000 g 离心10min，取出上清液；沉淀中再加1omL甲醇，涡旋报落3min,4po0本心10min，合并两次上清液，混匀，于45℃下氮气吹干，用1mlp117.4mol/L/PBS稀释液充分溶解后待检。6.2尿液制样澄清的尿液可直接用于检测；若尿液混泌，福妥,A00