WS_T 631-2018日本血吸虫毛蚴检测 尼龙绢袋集卵孵化法.pdf

ICS 11.020C 61Ws中华人民共和国卫生行业标准WS/T 631—2018日本血吸虫毛呦检测尼龙绢袋集卵孵化法Detection of Schistosoma japonicum miracidiumEgg hatching method after nylon mesh bag concentration2018 - 09 - 26 发布2019-04-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会 发 布 WS/T 631—2018前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位：浙江省医学科学院寄生虫病研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、安徽省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所、浙江省开化县疾病预防控制中心。本标准主要起草人：严晓岚、闻礼永、郑彬、汪天平、熊彦红、张剑锋、林丹丹、卢美、周晓农。I WS/T 631—2018日本血吸虫毛检测尼龙绢袋集卵孵化法1范围本标准规定了检测人体粪便中日本血吸虫毛坳的尼龙绢袋集卵孵化法。本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对日本血吸虫毛的检测。2规范性引用文件1下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS233病原微生物实验室生物安全通用准则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1日本血吸虫虫卵Schistosomajaponicumegg呈椭圆形，淡黄色，大小为（74～106）μum×（55～80）μm，卵壳薄而均匀，无卵盖，侧面有一小棘，成熟虫卵内可见毛坳。3. 2 日本血吸虫毛呦Schistosomajaponicummiracidium日本血吸虫幼虫发育中的最早阶段，呈梨形或长椭圆形，左右对称，银灰色，大小为（78～120）μm×（30～40）μm，前端有锥形突起，体表具有纤毛，3.3毛呦孵化 miracidium hatching毛哟在日本血吸虫虫卵内完成胚胎发育后破壳而出的现象。4仪器设备4.1光照培养箱1 WS/T631—2018光照强度：1Lx～5000Lx4.2显微镜光学显微镜：40×～400×4.3放大镜放大倍数：10×5试剂材料5.1孵化用水采用无原生动物、水中余氯低于0.3mg/L、pH6.8～7.2的清洁水，参见附录A。5.2尼龙绢袋57um/25.4mm（260目）尼龙绢袋，参见附录B5.3筛子孔径为250μm/25.4mm（60目）。5.4烧瓶250mL或500mL三角或长颈烧瓶。5.5其他压舌板或竹签、夹子、毛细吸管、载玻片、2%碘酒等。6 检测步骤6.1样本准备采集受检者新鲜粪便，重量不少于30g，存放于广口带盖且防渗漏洁净的密闭容器中，将受检者基本信息（姓名、编号、送检日期）标记于容器外部。采集后的样本应及时送检，如未能及时检测，应在4℃条件下冷藏保存，时间不超过24h。6.2样本检测6.2.1验收登记验看粪便重量、质量及标签，核对无误后统一编号，登记。6.2.2淋水冲洗6.2.2.1将筛子叠放于尼龙绢袋上，尼龙绢袋下口用夹子夹住。6.2.2.2取受检者粪便30g置于筛子中，用水冲淋，压舌板或竹签调浆，使粪液滤入尼龙绢袋中。6.2.2.3移去筛子，继续用水冲洗袋内粪渣，用压舌板或竹签轻轻振荡尼龙绢袋使过滤加速，直至滤出液变清为止。2 WS/T 631—20186.2.2.4将尼龙绢袋下口移入烧瓶口内，取下夹子，将袋内的滤渣用孵化用水淋洗入烧瓶，继续加孵化用水满至离瓶口1cm处。6.2.3毛蜘孵化将盛有滤渣的烧瓶置于光照培养箱（20℃～30℃）或相同室温下孵化，在3600Lx～3800Lx光照强度下，孵化4h～12h（范围为0.5h～24h），需观察2～3次，参见附录C。每批实验均需设置血吸虫虫卵阳性粪便作为对照。6.2.4毛观察取出烧瓶，瓶口向着光源，背衬以黑色背景，平视观察水面下0～4cm范围内浮游生物，每瓶每次观察时间不少于3min。必要时可用放大镜观察。发现毛坳后，用毛细吸管吸出，均匀分滴于载玻片上观察其游动状态，然后加1滴碘酒固定，在显微镜下（40×～100×）观察形态。毛坳应与水中原生动物相鉴别，参见附录D。为提高检出率，如孵化阴性，可进行沉渣镜检虫卵。6.3结果判定查见日本血吸虫毛即判定为阳性。3 WS/T 631—2018附录A（资料性附录）孵化用水、用具及废弃物处理A.1孵化用水处理A.1.1自来水处理将自来水放在开的容器内静置24h让其自然脱氯，或在自来水中加入硫代硫酸钠（4mg/L～8mg/L），静置30min后使用。A.1.2井水处理若水质较浑浊，可静置至澄清或加入明矾澄清水质（30mg/L40mg/