SN_T 1135.2-2016马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1135.2--2016代替SN/T 1135.2-2003马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法Detection and identification of Potato yellow dwarf virus2016-12-12 发布2017-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 1135.2-2016前言SN/T1135系列标准共分为13部分：第1部分：马铃薯癌肿病检疫鉴定方法；第2部分：马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法；第3部分：马铃薯帚顶病毒检疫鉴定方法；第4部分：马铃薯黑粉病菌检疫鉴定方法；第5部分：马铃薯环腐病菌检疫鉴定方法；第6部分：马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法；第7部分：马铃薯A病毒检疫鉴定方法；第8部分：马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法；第9部分：马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法；-第10部分：马铃薯V病毒检疫鉴定方法；-第11部分：马铃薯皮斑病菌检疫鉴定方法;一第12部分：马铃薯 M病毒检疫鉴定方法；第13 部分：马铃薯 Y病毒检疫鉴定方法。本部分为SN/T1135的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分代替SN/T1135.2一2003《马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法》。本部分与SN/T1135.2-2003相比，主要技术性差异如下：一删除了“术语和定义”一章；增加了“马铃薯黄化矮缩病毒基本信息”一章；删除了“现场检疫与抽样”节；-增加了“检测方法”一节；增加了 RT-PCR检测方法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院。本部分主要起草人：李明福、张永江、丁小兰、刘忠梅、赵竹、王秀芬、李桂芬、陈燕芳、曾庆才、刘善斌。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1135.2—2003。 SN/T 1135.2—2016马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法1范围SN/T1135的本部分规定了马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定的基本原则和方法。本部分适用于所有进境种薯、商品用薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质中马铃薯黄化矮缩病毒的检疫鉴定以及马铃薯黄化矮缩病毒引起病害的田间调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3马铃薯黄化矮缩病毒基本信息中文名：马铃薯黄化矮缩病毒学名:Potato yellow dwarf virus缩写:PYDV分类地位：弹状病毒科（Rhabdoviridae），细胞核弹状病毒属（Nucleorhabdovirus）。马铃薯黄化矮缩病毒的其他信息参见附录A。4　方法原理马铃薯黄化矮缩病毒的血清学特性、分子生物学特性和生物学特性是检疫鉴定的主要依据。5仪器设备、用具及试剂5.1仪器设备电子分析天平（0.0001g）、小型离心机、台式冷冻离心机、恒温水浴锅、酶标仪、普通PCR仪、电泳系统、pH计、凝胶成像系统、4℃冰箱、超净工作台、一80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、涡旋振荡器、微波炉、电子透射显微镜等。5.2用具可调式微量移液器（2.5 μL、10 μL、20 μL、100 μL、200 μL、l 000 μL、5 000 μL)及相应的无 RNase吸头、无RNase离心管、PCR管、研钵、样品袋、标签等。5.3试剂有特殊说明除外，所有实验用试剂均为分析纯1 SN/T 1135.2—2016双抗体酶联免疫吸附测定、RT-PCR检测试剂分别见附录B和附录 C。6样品制备抽样按照SN/T2122的规定进行。将马铃薯块茎种植在隔离温室中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组)并编号。采集的叶片进行双抗体酶联免疫吸附测定、RT-PCR、电镜检测或生物学测定。7检测方法7.1双抗体酶联免疫吸附测定见附录 B。7.2RT-PCR检测见附录 C。7.33免疫电镜检测按照SN/T1840中的方法进行电镜观察，参照附录A病毒粒体形态判定免疫电镜检测结果。7.4生物学测定见附录 D。8结果判定7.1、7.2、7.3和7.4中的两种检测结果为阳性，即可判定检出马铃薯黄化矮缩病毒。9样品保存与记录结果9.1　样品保存经检验确定携带马铃薯黄化矮缩病毒的样品应在合适的条件下保存，马铃薯病薯块及叶片样品在一20℃或－80℃冰箱中保存,试管苗保存于组培室中，做好标记和登记工作。保存期满后，需经灭活处理。9.2结果记录与资料保存