SN_T 3729.7-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第7部分：葡萄成分检测　 PCR法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.7-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法PCR 法第7部分：葡萄成分检测Identification of fruit species in export food and drink-Part 7 :Detection of Vitis vinifera ingredient-PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3729.7--2013前創言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为以下10个部分：-第1部分：草莓成分检测PCR法；第2部分：杏成分检测实时荧光 PCR法；第3部分：梨成分检测实时荧光 PCR法；第4部分：芒果成分检测实时荧光PCR法；-第5部分：木瓜成分检测实时荧光 PCR法；-第6部分：苹果成分检测实时荧光 PCR法；一第7部分：葡萄成分检测PCR法;第8部分：山楂成分检测实时荧光 PCR法；-第 9部分：桃成分检测　实时荧光PCR法；第10部分：香蕉成分检测　实时荧光PCR法。本部分为SN/T3729的第7部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局。本部分主要起草人：吴亚君、陈颖、韩建勋、黄文胜、王斌、李想、高宏伟、陈双雅、邓婷婷。1 SN/T 3729.7—2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第7部分：葡萄成分检测PCR 法范围SN/T3729的本部分规定了出口食品和饮料中葡萄成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以水果为原辅料的食品中葡萄成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为1%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1葡萄 vitis vinifera葡萄科葡萄属植物的通称，为落叶藤本植物。3.2清汁 clarified juice经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果汁。3.3浊汁 cloudy juice未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。缩略语4下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonuleoside triphosphate)dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate）dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosine triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate)1 SN/T 3729.7-2013dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cety ltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷[tris（hydroxymethyl）aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq:水生栖热菌（Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density)5　方法提要提取DNA，以DNA为模版，分别采用葡萄的特异性检测孕物进行-PCR扩增，观察PCR的扩增现象，进行食品及饮料中葡萄成分的检测鉴定，其中以葡萄果肉DNA为阳性对照，以非葡萄来源的DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。试剂和材料6除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物和探针：见表1。表 1 引物探针序列引物/探针引物/探针序列（5’=3）扩增片段长度靶基因内参照5′端引物CTTGATTTTACCAAAGATGATGA植物核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/159 bp加氧酶基因TTCTTCGCAGTACCCGCAd内参照3端引物葡萄5端引物GCACCGTTTTCAAGACCGAT93 bp葡萄类甜蛋白基因葡萄5端引物CATCAGGGCACCTAGTCTTG6.2