NY 545-2002猪痢疾诊断技术.pdf

ICS 11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 545—2002猪痫疾诊断技术Diagnostic techniques for swine dysentery2002-12-01实施2002-08-27 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 545—2002前言猪痢疾是危害严重的猪疫病。猪痢疾(swine dysentery 简称 SD)是一种严重的粘液性出血性腹泻病，是猪特有的一种慢性或急性肠道传染病。厌氧性猪痢疾蛇样螺旋体（Serpulina hyodysenteriae 简写Sh)为 SD病原,而肠道其他厌氧菌可加剧病情。本病在流行病学、临诊症状、病理变化等方面具有一定的特征性，是综合性诊断不可缺少的部分。但本病的确实诊断应依据从大肠或粪便中分离出Sh才能进行定性。在取得培养结果前，新鲜粪便或大肠粘膜及其内容物抹片镜检Sh也是一种实用的辅助手段。本标准的附录A、附录B均为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫化技术委员会归口。本标准起草单位：山东农业大学、农业部动物检疫所。本标准主要起草人：崔言顺、尹燕博、徐海花、蒋正军、郭福生、肖传发。 NY/T 545--2002猪痢疾诊断技术1范围本标准规定了猪痢疾(SD)诊断的技术要求。本标准适用于猪痢疾的诊断。本标准所规定的粪便中猪痢疾蛇样螺旋体(Sh)显微镜检查不适用于急性病例后期、慢性或隐性及投药后病例。本标准肠致病性试验中结肠结扎试验可根据条件选做。2 流行病学2.1猪疾在自然流行中只发生于猪。各种年龄、品种、性别的猪皆可发病，但幼猪(1.5～4 月龄)最多见，而哺乳仔猪、成年猪发病较少。2.2本病主要经消化道感染。各种应激因素、阴雨潮湿、气候多变,均可促进本病发生。2.3本病无季节性，常呈缓慢传播，且流行持续期长，多数病猪转为慢性，康复后（自然康复或治疗后）可复发或多次复发。3 临诊症状3.1潜伏期:2 日至2个月以上，一般为 1～2周。3.2最急性：多见于爆发本病之初，表现急性剧烈腹泻，排便失禁，呈高度脱水状态而迅速死亡。病程12 h~24 h.3.3急性：病开始多为排软粪或稀粪，随即粪中出现大量粘液和血液（凝块），呈油脂样、蛋清样或胶冻状,粪色为棕色、红色或黑红色不等,病猪迅速消瘦,常转为慢性或死亡。病程1～2周。3.4亚急性或慢性：粘液出血性下痫时轻时重，生长发育停滞，常呈恶病质状态。部分康复猪经一定时间可以复发。病程4周以上。3.5本病用抗菌药物和对症治疗,可获临床治愈效果,亦为诊断本病的一个佐证。4病理变化4.1主要病变见于大肠,其他组织器官均无特征性病变。4.2早期病变常出现在结肠襟顶部，随病情进一步发展可以蔓延至盲肠、整个结肠和直肠前段。急性病例表现为粘液性、出血性和纤维素性渗出，肉眼可见大肠粘膜充血、肿胀和出血，并有胶陈样附着物，常混有血液和纤维素。严重时，粘膜表面有散在性或弥散性糠麸样或干酪样坏死物覆盖，刮去后露出不规则糜烂出血溃疡面。5粪便中 Sh显微镜检查5.1材料准备5.1.1器材：显微镜，暗视野镜头，玻片及盖玻片，酒精灯等。5.1.2染色液：结晶紫染色液（革兰氏染色第一液)或稀释的石炭酸复红。5.1.3样品：病猪新鲜粪便（含粘液）或直肠拭子或大肠内容物及粘膜。 NY/T 545—20025.2操作方法5.2.1染色样品制作：取样品少许直接抹片，干燥，火焰固定，以结晶紫液或稀释复红染色2min~3 min，水洗，吸干后待检。5.2.2悬滴样品制作：取样品少许悬于少量生理盐水中，作成悬滴样品后待检。5.2.3每份样品最少制片2张。5.2.4显微镜检查：染色样品以油镜直接观察，悬滴样品在暗视野（或暗光)400倍～1000倍镜头下观察。5.2.5每片样品至少观察10个视野。5.3结果判定典型Sh 菌体长6 μm～8.5μm，呈2个～~5个疏螺旋状，两端尖锐，呈蛇样活泼运动（暗视野）。当视野中有数量较多(3条～5条以上)Sh样菌体时（见图1),在获培养结果前,可作为诊断的重要参考依据。注：图中小弯曲菌为弯杆菌。图 1 病猪粪便中的猪痫疾蛇样螺旋体6大肠组织中Sh显微镜检查6.1 材料准备6.1.1器材：切片机，显微镜，染色缸，盖玻片，水浴锅，温箱等。6.1.2试剂：福尔马林，95%及100%酒精，二甲苯，切片石蜡，结晶紫染色液，姬姆萨氏染色液，蛋清等。6.1.3样品：有病变大肠。6.2操作方法6.2.1大肠组织切片样品制作6.2.1.1分别切取小块(1cm²)样品(盲肠、结肠和直肠前段)置10%福尔马林中至少固定3h～4h。6.2.1.2取出样品用流水冲洗1h。6.2.1.3置样品于39℃的95%酒精（三缸）及无水酒精中，各脱水30min。6.2.1.4将脱水后样品放人38C二甲苯中（二缸），各10m