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紫外分光光度法测定有机物实验方法 （修订稿） 紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 紫外分光光度计1.1 (T6)；配石英比色皿(1cm)：4个； 1.2容量瓶(100mL、50mL)：各10只； 1.3吸量管(1mL、2mL、5mL、10mL)：各1支； 1.4移液管(20mL、25mL、50mL)：各1支。 2.试剂 2.1标准溶液(1mg/mL)：从维生素C、水杨酸、糖精钠、苯甲酸四种物质中任取其 中两种，分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。其必为给出的两种标准物质中的一种。 3.实验操作 3.1吸收池配套性检查 石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ 为100%，测定其余吸 收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为 校正值。 说明：参赛选手可以自由选择使用比色皿的个数（大赛提供4个）。 3.2未知物的定性分析 将两种标准储备液和未知液均配成浓度约为10ug/mL的待测溶液(配制方法由选手 自定)。以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内测定三种溶液吸光度，并作吸收曲 线。根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的 测量波长。 四种标准物质溶液的吸收曲线参见附图。 3.3未知物的定量分析 根据未知液吸收曲线上最大吸收波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制 待测溶液。合理配制标准系列溶液(推荐：标准储备液先稀释10倍 （100ug/mL），然后 再配制成所需浓度），于最大吸收波长处分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以 相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据待测溶液的吸光度，从标准曲线上查出未知 样品的浓度。未知样要平行测定两次。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液10mL，在100mL 容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL 上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确 移取10mL维生素C未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶 液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲 线上查得未知液的浓度。 3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取 1mg/mL的苯甲酸标准储备液10mL，在100mL 容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL 上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为0、1、2、4、6、8、10ug/mL）。准确 移取10mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶 液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲 线上查得未知液的浓度。 3.3.3糖精钠含量的测定：准确吸取 1mg/mL的糖精钠标准储备液10mL，在100mL 容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL 上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确 移取10mL糖精钠未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液 的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线 上查得未知液的浓度。 3.3.4水杨酸含量的测定：准确吸取 1mg/mL的水杨酸标准储备液10mL，在100mL 容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL 上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确 移取10mL水杨酸未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液 的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线 上查得未知液的浓度。 4.结果计算 根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液的浓度。 - 1 -