茶树蛋白质提取纯化及双向电泳的研究.docxVIP

茶树蛋白质提取纯化及双向电泳的研究 功能诱导组研究的繁荣促进了蛋白质组学作为后基因组时代的研究内容之一。双向凝胶电泳技术是蛋白质组研究的三大关键核心技术之首 1 材料和方法 1.1 材料表面 取自福建农林大学教学试验茶场的毛蟹品种, 一芽二叶, 液氮固样, 贮存于-80℃冰箱备用。 1.2 蛋白质提取与生化 方法1:样品用液氮研磨, 过滤后, 按文献[14], 即人体细胞蛋白质双向电泳方法进行。 方法2:按文献[12], 即水稻蛋白质双向电泳分析新方法进行。 方法3:按文献[11], 即荔枝蛋白质双向电泳的改良方法进行。 方法4 (改良方法) : 蛋白质丙酮干粉制备:研钵用适量的液氮预冷后, 加入0.4 g的水不溶性PVP (Water insoluble polyvinylpyrrolidone) , 0.1 g DTT (dithiothreitol) 和茶叶样品2.0~2.5 g, 在液氮中研磨成粉末, 转入10 ml离心管, 悬浮于8倍体积的-20℃预冷丙酮[含质量分数为10%TCA (trichloroacetic acid) 和体积分数为0.07%β-Me (β-Mercaptoethanol) ]。涡旋振荡后于-20℃静置1 h, 4℃, 15 000 g离心15min。弃上清液, 取沉淀, 加入6倍体积的-20℃预冷丙酮 (含0.07%β-Me) , 涡旋后于-2