RPHPLC法测定垂体后叶注射液升压素与缩宫素效价的研究.doc

2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 2(2分离度试验称取l、2、3、4适量，用流动相溶解并稀释制成每l mL中约含40斗g的溶液，作为分离度 测 试溶液，按“2(1”项色谱条件测定，见图2(图略)。结果显示出峰顺序为1、4、3、2，相邻色谱峰间的分离度 大于 3(0。 2(3检测限试验称取1、2、3、4适量，用流动相溶解并稀释制成一系列溶液，按“2(1”项下色谱条件测定。 结果3的浓度为0(20斗g?mL。时的S,N为2(8，1的浓度为0(12“g?mL一时的S,N为2(5，2的浓度为 0(25斗g?mL。1时的S,N为2(9，4的浓度为0(20}xg?mL。时的S,lV为2(8。 mL量瓶中，分别经酸(1 tool?L。1盐酸溶液5 2(4强制破坏试验称取美索巴莫约0(1 g，置于50 mL，室温放置30 min)、氧化(30,过氧化tool?L。1氢氧化钠溶液5 mL，室温放置30 min)、碱(1 10 氢 mL，室温放置3 h)、热(甲醇12 mL，100 oC水浴加热3 h)和光(甲醇2 mL，自然光下照射 h)破 坏后，将上述经酸、碱破坏的供试品溶液分别中和后，用流动相溶解并稀释至刻度作为测定5 液，其余 样品用流动相溶解并稀释至刻度作为测定液。按“2(1”项下色谱条件测定，见图3(图略)。试验结 果显示在碱性试验条件下最不稳定，在酸、热等试验条件下有降解产物产生，在氧化、光等试验条件 下基本稳定。 2(5影响因素试验旧。 取本品，分别放置在60?电热恒温箱中(高温试验)，RH 92(5,的容器中(高湿 度 试验)，光强度4500 k的试验箱中(强光照射试验)。于第10 d分别称取上述样品约0 (g，置于150 mL量瓶 中，用流动相溶解并稀释至刻度作为测定液。按“2(1”项下色谱条件测定。试验结果显示美索巴 有引湿性，在高温(60?)、高湿(RH 莫几乎没 92(5,)和光照(4500 lx)条件下基本稳定。表明本品在固体状态稳定 性良好。 3讨论与结论 根据美索巴莫的合成工艺，本品可能存在的杂质有1(起始原料)、2(中间体)和4[副产物，结构式见图 4(图略)]。经检测3批样品，结果发现样品中存在2个杂质，经对杂质与杂质对照品的相对保留时间和紫 外光吸收图谱进行比对，确定样品中的杂质为l和4。其中杂质1为未反应完全的起始原料，杂质4为中间 体2氨解时的副产物。 同样，在强制破坏试验中，采用降解产物与杂质对照品的相对保留时间和紫外光吸收图谱进行比对，确 定了在酸性条件下的主要降解产物为4;在热、碱性条件下的主要降解产物为I和4。杂质l来源于c处酯 键的水解，杂质4为a处羟基与b处羰基进行的酯交换反应产生的，见图5(图略)。上述试验结果表明:美 索巴莫在溶液状态，酸性条件下主要发生分子内的酯交换(重排)反应;热、碱性条件下还会发生酯键的 水解。 从以上试验结果可以获知:杂质l和4即是工艺杂质，也是降解产物。因此，合成工艺中通过优化反应 条件、工艺参数等可降低杂质的含量;贮藏环境避免高温和水分等可降低产生降解产物的风险;同时提示制 剂工艺中应避免酸性、碱性辅料的使用和高温操作的工艺。 本文采用HPLC—DAD法，结合杂质对照品确证了美索巴莫的杂质，方法简便。 参考文献(略】 lip—I-1PLC法测定垂体后叶注射液升压素与缩宫素效价的研究 史芳亮，黄坚，邵泓，陈钢 (上海市食品药品检验所，上海201203) 摘要 目的:建立测定垂体后叶注射液升压素与缩宫素效价的高效液相色谱法，探讨HPLC法代替生物测定法的可行性。方 x250 mm法:应用Inertsi]ODS—SP色谱柱(4(6 mm，5斗m);以0(02 mol?L“的磷酸二氢钠溶液为流动相A，以0(04 t001( L。1磷酸二氢钠溶液一乙腈(50:50)为流动相B，梯度洗脱;流速为1(0 mL?min,;检测波长为220 nm。结果:升压素和缩宫 素的峰面积与浓度的线性关系良好(r0(9988)，平均加样回收率升压素在109(5,,116(2,之间，缩宫素在92(3,。 2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 98(5,之Pq。RP—HPLC法与生物测定法测定结果有一定差异，但两者间有很好的相关性。结论:RP—HPLC法快捷，重复性 好，易于操作，影响因素少，可替代生物测定法测定垂体后叶注射液的升压素与缩宫素的效价。 关键词:垂体后叶注射液;RP—HPLC;升压素效价;缩宫素效价; Studies on RP-—-HPLC determination of the assays of andofvasopressin oxytocin injection posteriorpituitary S