SN 1473-2004兔粘液瘤病琼脂免疫扩散试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1473—2004兔粘液瘤病琼脂免疫扩散试验操作规程Protocol of agar gel immunodiffusion test for rabbit myxomatosis2004-11-17 发布2005-04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1473—2004前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张敬友、柯家法、邓娟仙、张扬。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1473—2004兔粘液瘤病琼脂免疫扩散试验操作规程1 范围本标准规定了兔粘液瘤病琼脂免疫扩散试验操作规程。本标准适用于免粘液瘤病抗体的检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（eqvISO3696：1987)3缩略语下列缩略语适用于本标准。AGID Test: Agar gel immunodiffusion test琼脂免疫扩散试验。4试验原理琼脂凝胶呈多孔结构，孔内充满水分，1%琼脂凝胶的孔径约为85nm，抗原和特异性抗体在凝胶中从高浓度区域向低浓度区域扩散时所受阻力很小，基本上呈自由扩散形式。由于不同抗原分子的分子量、结构、形状和电荷量不同，因此扩散系数不同，在凝胶中的扩散也就不同。当抗原与相应抗体经扩散在凝胶中相遇，形成抗原抗体复合物，如果两者在比例适当处相遇，则形成最大复合物。由于复合物颗粒增大，因而不能继续扩散，而形成肉眼可见的沉淀带，称为免疫沉淀线或免疫沉淀带。不同分子的抗原抗体系统可各自形成两条或更多的沉淀带，可根据出现的沉淀带来判断被检血清中是否存在抗体或被检物中是否存在抗原。5试剂和材料5.1抗原：由指定单位提供。5.2标准阳性血清和标准阴性血清：由指定单位提供。5.3被检材料：按常规方法采血分离待检血清。5.43琼脂糖：分析纯。5.5氯化钠(NaCl)：分析纯。5.6叠氮钠：分析纯。5.7水：符合GB/T6682分析实验室用水规格。5.8微量移液器：普通微量移液器。5.9 平皿：普通平血。5.10微量滴头：与移液器配套滴头。5. 11三角烧瓶：普通可加热三角烧瓶。6操作步骤6.13琼脂糖凝胶平板的制备：称取琼脂糖0.90g，氯化钠0.85g，加人100mL蒸馏水，经电磁振荡煮1 SN/T 1473—2004沸融解后，冷却至45℃，加人0.01%叠氮钠。将充分融化的琼脂糖凝胶加到平皿中，凝胶厚度为2.5mm，凝固后把平倒置，在4℃可保存10d。6.2打孔：中间一孔,周围六孔为一组,孔径 4 mm,孔间距2.4 mm。6.3加样：中间孔加抗原，周围孔加被检样品，加样量以孔平为准。加样后置湿盒内于37℃反应。6.4每次试验设标准阳、阴性对照。7结果判定7.124 h初判,72 h终判。当对照成立时，进行判定。7.2阳性：被检样品与抗原之间出现两条以上沉淀线。7.3可疑：被检血清与抗原之间出现一条沉淀线判为可疑，一周后采样检测，出现两条以上沉淀线判定为阳性，出现一条或无条沉淀线判为阴性。 L/NS中华人民共和国出人境检验检疫行业标准免粘液瘤病琼脂免疫扩散试验操作规程SN/T 1473—2004*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷* 开本 880×1230 1/16印张 0.5字数4千字2005年2月第一版　2005年2月第一次印刷*SN/T 1473-2004