NY_T 2310-2013花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2310—2013花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法Evaluation method of peanut resistance toAspergillus flavus infection2013-08-01实施2013-05-20发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 2310—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：张奇、李培武、张兆威、丁小霞、周海燕、李冉、雷永、土圣玉。 NY/T2310—2013花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法1范围本标准规定了花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法。本标准适用于花生黄曲霉侵染抗性的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19547感官分析方法学量值估计法3原理用黄曲霉菌接种待测花生样品，恒温恒湿培养，计算黄曲霉菌侵染接种花生样品的侵染指数.评价花生黄曲霉侵染抗性。4试剂与材料除非另有说明，均使用分析纯试剂和（B/T6682规定的一级水。4.1氯化汞（HgCl）：化学纯。4.2硝酸钠（NaN)）：化学纯。4.3磷酸氢二钾（KHPO),）：化学纯。4.4七水合硫酸镁（MgS()，·7H.0))：化学纯。4.5氯化钾（KC1)：化学纯4.6硫酸亚铁（FeS()，·7H,O)：化学纯。4.7蒸糖：化学纯。4.8琼脂：水分.22%.灰分3%。4.9察氏培养基：准确称取硝酸钠3.00g，磷酸氢二钾1.00g.七水合硫酸镁0.50g，氯化钾0.50g.七水合硫酸业铁0.01g，蔗糖30.00g，琼脂20.00g，加水定容至1000ml。加热溶解，锥形瓶50mL分装后121℃灭菌20min。4.10Hg(l溶液：2(Hg(l,）=0.2%，准确称取0.2g氯化汞，加水定容至100ml。现配现用。4.11无菌水：121℃灭菌20min，冷却待用4.12吐温水溶液：999ml.水中加人1ml.叶温-20.混匀后121℃高压火菌20min，冷却待用。4.13黄曲霉菌株（菌株编号：AF2202)。5仪器设备5.1血球计数板。5.2高压灭菌锅。5.3生物安全柜。1 NY/T 2310—20135.4恒温恒湿培养箱。5.5离心机。5.6显微镜。5.7旋涡混合器。5.8培养皿：内径20cm。5.9烧杯：100ml。5.10锥形瓶：150ml。6试样制备取无损健康的花生英果，手工小心剥取籽仁，挑选种皮完好、无病虫斑的饱满籽粒50粒，7黄曲霉菌孢子悬浮液配制生物安全柜中无菌取出黄曲霍菌株（4.13）.接种于察氏培养基（4.9）.30培养8d～10d.用吐温水溶液（4.12）洗脱分生饱.川血球计数板在显微镜下训算孢浓度.调整孢子浓度到510″个/ml的孢子忍浮液.备用8接种与培养8.1表面灭菌将花生籽粒置于装有HgCl.溶液（4.10）的烧杯中浸泡10min.取出用无菌水漂洗两次.保持籽粒种皮完整。8.2接种将火菌后的花生籽粒移人干净烧杯中.加人5×10″个/ml的孢子悬浮液1ml.轻摇烧杯使菌液与籽粒充分均匀接触.然后用无菌镊了轻轻取出均匀地分散排列」3个带灭菌滤纸的培养Ⅲ（5.8)内。8.3培养于恒温恒湿培养箱430℃、湿度90%培养6d。9空白对照设置对照组，除不接种黄曲霉外.其他操作与接种操作相同。10）侵染指数计算10.1花生侵染分级根据GB/T19547的要求分组采用肉眼观察花生籽粒感染黄曲霉后霉菌覆盖籽粒的面积百分比进行侵染分级：0级.花生籽粒无感染：1级-覆盖率占种了表面积1/3以下；2级.覆盖率占种子表面积1/3～2/3；3级.覆盖率占种子表面积2/3以七。警告：因黄曲霉毒索剧毒·操作中注意保护人身安全。10.2侵染指数计算侵染指数以R计.按式（1）计算。(1. Xn): /RX 100(1)NX3式中：R—侵染指数；2 NY/--花生籽粒感染黄曲霉后霉菌覆盖籽粒的面积百分比对应的侵染级数花生籽粒感染黄曲霉后各级颗粒数；71,N—实验组花生总颗粒数。测定结果取两次重复测定的算术平均值，保留小数点后：位。11花生籽粒黄曲霉侵染抗性鉴定侵染指数15以下为高抗，16～30为中抗，31～50为中感，51以上为高感T3 中华人民共和国农业行业标准花生黄曲霉侵染抗性鉴定方法NY/T?*中国农业出版社出版（北京市朝阳区麦子店街18号楼）（邮政编码：100125网址： )北京昌平环球印刷