SNT 2376-2009番茄酱中主要腐败微生物的检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2376—2009番茄酱中主要腐败微生物的检验方法Method for the detection of main corruptmicroorganisms in tomato paste2009-09-02发布2010-03-16 实施ON中华人民共和国层较191616 查询真伤发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2376—2009前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理标准化委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国新疆出人境检验检疫局负责起草。本标准的起草人：黄玲、蒋刚强、窦辉、刘小兰、吴海文、黄忠梅。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2376—2009番茄酱中主要腐败微生物的检验方法1范围本标准规定了番茄酱中芽孢杆菌、葡萄球菌的检验方法。本标准适用于评价袋装和罐装番茄酱中芽孢杆菌和葡萄球菌等主要腐败微生物检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引！用文件，其最新版本适用于本标准。GB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1腐败微生物corrupt microbrgnisms经过一定条件的培养（如：培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），分离出的能引起食品腐败变质的微生物。3.2番茄酱中主要腐败微生物main corrupt nicroorganisms in tomato paste从袋装或罐装番茄酱中分离出的能引起番茄酱产品腐败变质的芽孢杆菌、葡萄球菌等。4设备和材料4.1恒温培养箱：36℃±1℃l4.21高压蒸气灭菌锅。4.3冰箱:0℃～4℃。4.4显微镜：10×～100×。4.5天平：最大称重达2000g,感量0.1g。4.6灭菌吸管:1mL(具0.01 mL刻度）、10mL(具0.1 mL刻度）。4.7灭菌试管:16 mmX160 mm、18 mmX180 mm。4.8灭菌培养血皿:直径90 mm。4.9 pH 计或 pH 试纸。5 培养基和试剂5.1平酸菌增菌培养基:见附录 A中第 A.1章。5.2 嗜热耐酸杆菌琼脂培养基:见附录 A 中第 A.2 章。5.3胰大豆陈肉汤培养基:见附录 A中第 A.3 章。5.4改良 BCP培养基：见附录 A中第 A.4章。5.5 革兰氏染色液:见附录 A 中第 A.5 章。 SN/T 2376--20096检验程序6.1芽孢杆菌检验程序见图1。检样25g番茄酱+225mL生理盐水增菌平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌培养液36℃±1℃24 h ~~48 h平酸菌培养基或嗜热耐酸杆菌培养基36℃±1℃24 h~48 h生化特征染色镜检观察菌落特征报告芽孢杆菌检验程序图 1 2葡萄球菌检验程序见图2。6.2检样25g番茄酱+225 mL生理盐水增菌胰大豆陈肉汤培养液或改良 BCP 培养液24 h ~48 h36℃±1℃胰大豆陈肉汤培养基或改良 BCP培养基36℃±1℃24 h ~~48 h染色镜检生化特征观察菌落特征报告图 2 葡萄球菌检验程序7 操作步骤7.1增菌培养法7.1.1检样处理按无菌操作取番茄酱25g，加人225mL生理盐水，制成混悬液。2 SN/T 2376—20097.1.2　增菌培养吸取25 mL上述混悬液，接种于平酸菌增菌培养液或嗜热耐酸杆菌培养液（芽孢杆菌），36℃土1℃、培养24h。对生长较慢的微生物可延长培养至48 h。吸取 25 mL上述混悬液，接种子胰大豆陈肉汤培养液或改良 BCP 培养液中（葡萄球菌），36℃土1℃、培养24 h。对生长较慢的微生物可延长培养至48 h。7.2分离培养和鉴定7.2.1 分离将上述培养物，划线转种于平酸菌增菌培养基平板或嗜热耐酸杆菌培养基平板（芽孢杆菌），36℃士1℃、培养24 h。对生长较慢的微生物可延长培养至48 h。将上述培养物，划线转种于胰大豆陈肉汤培养基或改良 BCP培养基（葡萄球菌），36.℃土1℃、培养24 h。对生长较慢的微生物可延长培养至 48 h。7.2.2菌落特点芽孢杆菌：表面粗糙皱褶、不透明、白色。葡萄球菌：圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明菌落。菌落直径在1 mm～5 mm。7.2.3菌体形态将上述可疑菌落做涂片染色，进行显微镜观察。芽孢杆菌为革兰氏阳性芽孢杆菌，单个细胞（0.7 μm～0.8 uμm）×（2μm～3um）、着色均匀。无荚膜，全身鞭毛。芽孢呈椭圆或柱状。葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,直径0.4 μ