NY_T 2821-2015蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 67.180.10B 47NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2821—2015蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定液相色谱一串联质谱法Determination of caffeic acid phenethyl ester in propolis-Liquid chromatography tandem mass spectrometry2015-10-09发布2015-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T2821—2015前言本标准按照GB/T1.1-一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。本标准起草单位：农业部农产品及转基因产品质量安全监督检验测试中心（杭州）、杭州蜂之语蜂业股份有限公司。本标准主要起草人：钱鸣蓉、王强、章虎、周萍、吴俐勤、王祥云、汪建妹、章征天1 NY/T2821—2015蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定，液相色谱一串联质谱法1范围本标准规定了蜂胶中咖啡酸苯乙酯的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于蜂胶乙醇提取物及蜂胶胶囊中咖啡酸苯乙酯的测定。本标准方法最低检出限为3mg/kg，定量限为10mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理用甲醇溶解，超声波提取蜂胶中的咖啡酸苯乙酯，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2稀释液：甲醇十水=80十20。4.3咖啡酸苯乙酯标准物质：纯度≥97%。4.4咖啡酸苯乙酯标准储备溶液：准确称取咖啡酸苯乙酯标准物质，用甲醇配制质量浓度为1000mg/L的溶液，一18℃冰箱中保存，有效期为12个月。4.5咖啡酸苯乙酯标准中间溶液：吸取适量咖啡酸苯乙酯标准储备溶液（4.4），用甲醇稀释配制质量浓度为1mg/L的溶液，0℃～4℃保存，有效期为1个月。4.6咖啡酸苯乙酯标准工作溶液：将标准中间溶液（4.5)用稀释液（4.2)稀释成0.0002mg/L、0.001mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.20mg/L和0.50mg/L多个质量浓度的标准工作溶液，绘制标准工作曲线。4.7滤膜：有机，0.22 μm(Φ25mm)。4.8聚丙烯离心管：50mL。5仪器5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2粉碎机。5.3分析天平：感量0.0001g。5.4超声波清洗器。5.5高速离心机：转速不低于7000r/min6分析步骤6.1试样的制备1 NY/T2821—20156.1.1蜂胶乙醇提取物的制备从全部蜂胶样品中取出约100g样品，装人洁净容器中分成2份，密封，并做标记。将试样于一10℃以下保存。样品测定前，取出冷冻贮存的试样20g～30g，迅速粉碎。6.1.2蜂胶胶囊的制备取装量差异项下胶囊内容物20g～30g，混匀。6.2试样处理准确称取0.2g（精确到0.1mg）蜂胶试样，置于150mL的具塞锥形瓶中，加入85mL甲醇，超声15min，冷却至室温，转移至100mL棕色容量瓶中具塞锥形瓶并转移至容量瓶中用甲醇定容，混匀。吸取10mL溶液至50mL离心管中，以7000r/min的转速离心10min，吸取1mL上清液至50mL棕色容量瓶中，用稀释液（：2)定容，混匀后过滤膜待测PUB6.3测定条件DARD6.3.1液相色谱参考条a)色谱柱：Ci8（甲酸的b)流动相：以俊铵溶液为流动间的例相B,A上miA流速：0.)Sd)进样量e)柱温：3L6.3.2A质谱参-喷高a)离子汇b）扫描负离c)喷雾电200:350d)毛细管e)雾化气帘光花撞f)检测方文应监派留时间和监测n碰撞能量中文名称eV咖啡酸苯乙酯35.1/1229;216.4定性测定酸苯乙酯标检出的色谱峰保留时间与网质保相对标准在士2.5%以内，并且在扣偏差不超过表2的规定，则样品中存在咖啡酸苯乙酯。除背景后所选择的两对离子对的表2定性测定时相对离子丰度的最大充许偏差相对离子丰度50%20%~50%10%~20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%6.5定量本方法采用外标法定量，将标准工作溶液（4.6)分别进样，以标准工作溶液质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，试液中分析物的响应值应在仪器测定的线性范围内。如试样溶液中咖啡酸苯乙酯质量浓度值超出0.50mg/L，则用稀释液（4.2)稀释后测定。在上述条件下，标准溶液和蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯的液相色谱一质谱/质谱多反应监测（MRM