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SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4612—2016国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测方法Detection of viral hepatitis C by real-time fluorescenceRT-PCR at frontier ports2016-08-23发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局3O涂层连
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测方法SN/T4612—2016*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室:(010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*1/16印张0.5字数10千字开本8802月第一版2018年2月第一次印刷印数1—500*书号:155066·2-324144定价14.00元
SN/T4612—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国四川出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人:田绿波、樊学军、史蕾、高国龙、陈肖潇、石莹。I
SN/T4612—2016国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测方法1范围本标准规定了国境口岸丙型肝炎病毒荧光RT-PCR检测的对象,标本的采集、运输和保存,检测程序及结果报告。本标准适用于国境口岸入出境人员丙型肝炎病毒的实验室检测,2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1193基因检验实验室技术要求WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用人间传染的病原微生物名录(卫生部2006年)3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1viral hepatitisC丙型肝炎病毒属于黄病毒科,是一种有包膜的RNA病毒。注:主要通过血液、性生活、母婴垂直传播,引起丙型病毒性肝炎,其中血液传播是丙肝病毒的主要传播方式。丙型肝炎呈全球性流行,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。临床上急性丙肝表现为谷丙转氨酶升高,恶心、食欲下降、尿黄、眼黄等症状,慢性丙型肝炎表现为容易疲劳、食欲欠佳、腹胀等。3.2荧光RT-PCRreal-timefluorescenceRT-PCR在常规RT-PCR的基础上,加入一条特异性的荧光探针,该探针为一条寡核苷酸,两边分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,PCR扩增时,利用Tag酶的5,一3”外切酶活性将探针酶切水解,使荧光报告基团和荧光萍灭基团分离,从而荧光监测系统可以接收到荧光信号。每经过一个PCR循环,荧光信号也和目的片段一样,有一个同步指数增长的过程,信号的强度与检测对象的核酸含量成正比,可根据数学模型计算出检测对象的含量3.3Ct 值cycle threshold在荧光RT-PCR扩增过程中,处于指数增长区范围之内的荧光信号值称为阈值(threshold),当扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数称为Ct值。1
SN/T4612—20164缩略语下列缩略语适用于本文件:HCV:丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus);RT-PCR:逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction);RNA:核糖核酸(ribonucleicacid);DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate);FAM:6-羧基荧光素(6-carboxyfiuorescein):MGB:小沟结合物,一种荧光淬灭基团(minorgroovebinder)5检测对象5.1人出境体检人员。5.2其他申请检验的人员。6生物安全和PCR防污染要求6.1按照《人间传染的病原微生物名录》中规定,丙型肝炎病毒属第三类病原微生物,病毒培养、未经培养的感染材料的操作应在生物安全二级(BSL-2)实验室中进行,灭活材料的操作、无感染性材料的操作可在生物安全一级(BSL-1)实验室中进行6.2遵循GB19489处置实验室废弃物LSN/T1193的规定执行。6.3PCR防污染措施按WS/T230和7主要仪器7.1荧光定量PCR仪及配套PCR反应管7.2生物安全柜。7.3冰箱(4℃、一20℃和一70℃)。7.4普通台式离心机。7.5高速冷冻离心机(最高离心力12000g以7.6微量可调移液器(10μL、100
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