SN_T 2660-2010食品微生物实验室菌种保藏方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2660—2010食品微生物实验室菌种保藏方法Preservation methods for culture collection in foodstuff microbiology laboratory2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防铁 SN/T 2660-2010前言本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张海滨、高旗利、张霞、刘培、王乃福、张海英、吴冬雪。 SN/T 2660—2010食品微生物实验室菌种保藏方法1 范围本标准规定了食品微生物实验室常用的菌种保藏的定义、技术原则、技术要求和技术方法。本标准适用于食品微生物实验室菌种的保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室　生物安全通用要求病原微生物实验室生物安全管理条例人间传染的病原微生物名录动物病原微生物分类名录3 定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1菌种保藏culture preservation将微生物菌种用各种适宜方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。3. 2定期移植法periodical subculturing又称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养,待生长充分后，于 4℃～6℃进行保存并间隔定时间进行移植培养的一种菌种保藏方法。3.3液体石蜡法 preservation in liquid paraffin又称矿物油保藏法，定期移植保藏法的辅助方法。将菌种接种在适宜的斜面培养基上，在最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注人灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4℃～6℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。3.4瓷珠保藏法porous beads preservation将培养好的微生物细胞或孢子制成悬浮液,转人装有无菌多孔玻璃珠(或瓷珠)的无菌瓶中，使其吸附于玻璃珠表面，去除多余悬浮液，低温冷冻保存的一种菌种保藏方法。3.5冷冻干燥保藏法　freeze-drying原理是微生物细胞在冷冻、减压条件下，发生“升华”脱水，细胞的生理活动趋于停止，得以长期维持存活状态。1 SN/T 2660--20103.6液氮超低温保藏preservation in liquid nitrogen将微生物菌种保藏在196℃的液氮中，或保藏在一150℃的气相氮中。其原理是微生物在一130℃以下新陈代谢趋于停止，因而能长期、有效地保藏。3.7preservation at -80 ℃一80℃低温保藏将微生物菌种保藏在一80℃冰箱的一种保藏方法。原理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢,以达到长期有效地保藏微生物。4基本原则微生物菌种的实验室操作应符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《人间传染的病原微生4.1物名录》《动物病原微生物分类名录》及-GB-19489.的有关要求。4.2针对微生物菌种特性选择适宜的保藏方法，宜采角两种或两种以上方法保存，以保持菌种的原有性状稳定和避免损失。4.3微生物菌种保藏工作不能对周围环境造成污染和危害。5技术要求微生物菌种保藏所使用的器Ⅲ要求清洁、透明、无破损、无裂痕5.1根据微生物菌种保藏需要选择适合培养基。5.25.3微生物菌种保藏过程中应注意无菌操作避免污染5.4微生物菌种移植过程,要对菌株编号及培养基分别进行核对，避免发生错误。5.5微生物菌种培养至稳定期或成熟期后进行保藏。5.6微生物菌种移植培养后，应与源保藏菌株的培养特性和菌株登记信息对照，检查无误后再存放。5.7微生物菌种保藏期间，要定期检查菌种存放设施的温度和湿度、菌株有无污染、棉塞有无霉变，如发现异常应重新移植培养后更换。5.8微生物菌种保藏应建立和保存其所有菌种的收集、储藏、保存和确认试验的记录。管理记录中还应包括(但不限于)以下内容：a）从原始菌种传代到工作菌种的代数；b）菌种生长的培养基及孵育条件；c）菌种生存条件。相关记录参见附录 A。技术方法66.1定期移植法6.1.1 适用范围本方法适用于大多数细菌和真菌。6.1.2　原理低温保藏可减缓微生物菌株的代谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变、延长菌株保藏时间2 SN/T 2660---2010的目的。保藏培养基一般含较多有机氮,糖分总量不超过2 %,既能满足菌株生长繁殖的需要，又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。6.1.3操作步骤具体