WST 23-1996尿中σ-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中6-氨基乙酰丙酸的分光光度WS/T 23--1996测定方法Urine--Determination of -aminolevulinicacid--Spectrophotometric method1主题内容与适用范围本标准规定了尿中的-氨基乙酰丙酸(8-ALA）的分光光度测定方法。最低检测浓度为0.3mg/L。本标准适用于正常人和接触铅工人尿中8-AIA浓度的测定。2原理尿中-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，与对-二甲氨基苯甲醛作用生成红色化合物，在波长554nm处比色定量。3仪器3.1分光光度计，10mm比色杯。3.2具塞比色管，10ml。3.3离心机。3.4电炉。3.5聚乙烯塑料瓶，100mlL。3.6尿比重计。4 试剂本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。4.1实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。4.2冰乙酸p2u=1.05g/ml.。4.3高氯酸，P2o=1.67g/ml。4.4无水乙酸钠。4.5对-二甲氨基苯甲醛。4.6乙酰乙酸乙酯。4.7乙酸乙酯。4.8乙酸盐缓冲液（pH=4.6）：于700ml水中加入57ml冰乙酸（4.2），82g无水乙酸钠（4.4），溶解后加水至1000ml。4.9显色剂：于30ml冰乙酸（4.2）中加入1g对-二甲氨基苯甲醛（4.5），5ml.高氯酸（4.3），5ml水，溶解后用冰乙酸（4.2）稀释至50ml，混匀，存于冰箱中。4.10-ALA标准溶液：准确称取0.01280g-ALA·HC1。用水溶解后，移入100mL容量瓶中，稀释中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施 WS/T 23--1996至刻度，此溶液1mL=0.10mg-ALA。再用水稀释成1ml,=10μg-AL.A的标准应用溶液。4.11质控样：标准尿样、加标的模拟尿、加标的正常人混合尿或接触者的混合尿。5采样、运输和保存用塑料瓶收集铅作业工人尿样50ml.，尽快带回实验室（夏季运输时最好冷藏），测比重后，放4（冰箱可保存二周。6分析步骤6.1样品处理6.1.1分别取1ml尿样于2支10ml具塞比色管中，各加1ml.水，2ml.乙酸盐缓冲液（4.8），混匀，其一为样品管，另一为尿样空白管。6.1.2向样品管中加入0.4ml.乙酰乙酸乙酯（4.6），向空白中加入0.4ml.乙酸盐缓冲液（4.8），充分混匀。6.2标准曲线的绘制6.2.1取6支10mL具塞比色管，按下表配制标准管。8-ALA标准管的配制01234管号500. 71. 0-ALA标准应用溶液（4.10)，ml0. 10.30. 52. 01. 91.71. 51. 31. 0水,mL01. 03. 05. 07. 0α-ALA 含量·μg10. 06.2.2向各管中加入2ml.乙酸盐缓冲液（4.8），0.4mL乙酰乙酸乙酯（4.6），混匀。6.2.3于沸水浴中加热12min，取出冷却至室温。6.2.4各加入4ml乙酸乙酯（4.7），加塞振摇100次，离心5min，静置分层6.2.5各取2ml.乙酸乙酯提取液于另6支10ml具塞比色管中，各加2ml，显色剂（4.9），混匀，静置10min，在554nm处，用10mm比色杯，以零管为参比测量吸光度6.2.6以吸光度为纵坐标，3-AI.A含量为横坐标，绘制标准曲线。6.3样品测定取6.1.2条制备的样品溶液.按6.2.3～6.2.5条操作。测得吸光度后，将样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中-ALA的含量。在测定前后及每次测定10个样品后，测定次质控样。一7 计算7.1按式（1)计算尿样换算成标准比重（1.020）下的浓度的校正系数（k）。1.020-1.000k(1)实测比重－1.0007.2按式（2)计算尿中-A1.A的浓度。·kX=(2)TF式中：X-一尿中-ALA的浓度，mg/L;一样品管中-ALA含量，μg;m-V—分析时所取尿样的体积,mL。2 WS/T23--19968说明8.1本法的检测限为0.30mg/L（取0.5mL尿样）。测定范围：0.30～10.00mg/L。精密度：CV=1.2%～3.6%。准确度：铅接触者的尿样加标回收率平均89.0%～95.7%（加标量：1.0，2.0，3.0，5.0 mg/L.n=6)。8.2接触者的尿样采集时间不限，采样时不存在污染问题。尿样4C保存14d相对偏差为十5.6%。8.3煮沸时间应从比色管放进水浴后，水重新沸腾，开始计算时间，不得少于12min。8.4尿中8-ALA含量高或颜色较深时，可减少取样量。8.5本法中红色生成物在60min内稳定8.6乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由山东