SN_T 4818-2017进出口食用动物中莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗的测定 酶联免疫吸附法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4818-—-2017进出口食用动物中莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗的测定酶联免疫吸附法Determination of ractopamine, salbutamol,clenbuterol hydrochloride in edibleanimal for imported and export-Enzyme linked immunosorbent assay method2018-03-01实施2017-07-21 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 4818-2017前·：言本标准按照GB/T1.1---2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：孙明君、孙涛、梁广辉、梁成珠、郑小龙、岳志芹、朱来华、徐彪。1 SN/T 4818-2017进出口食用动物中莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了进出口食用动物的血浆、尿液中莱克多巴胺、沙丁胺醇和盐酸克伦特罗残留检测的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于进出口禽类的血液、畜类的血液及尿液中莱克多巴胺、沙丁胺醇和盐酸克伦特罗残留量快速筛选检测，适用于出人境检验检疫工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理利用抗原抗体特异性结合的特性和酶的高效催化作用，通过化学方法将辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗(CL)偶联，形成辣根过氧化物酶标记克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体与特异性的抗克伦特罗抗体结合，使抗克伦特罗抗体固相化，然后加人待测克伦特罗和辣根过氧化物酶标记克伦特罗，它们竞争性地与克伦特罗抗体结合，洗涤后加显色剂，根据显色剂的颜色变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶标记克伦特罗少，显色剂颜色浅，反之则深。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450nm。沙丁胺醇与莱克多巴胺原理同克伦特罗。4试剂与材料4.11mol/L氢氧化钠：配制参见附录A，试验用水应符合GB/T6682要求。4.2乙酸乙酯：分析纯。4.3β-葡萄糖醛酸苷酶：含β-葡萄糖醛酸苷酶111000 U/mL。4.4磷酸钾缓冲液。4.5硼酸盐缓冲液。4.6包被缓冲液。4.7洗涤缓冲液。4.8封闭缓冲液。4.9稀释缓冲液。4.10辣根过氧化物酶标记偶联物稀释液。1 SN/T 4818-20174.11 底物液。4.12显色剂液。4.13 终止液。4.14抗抗体（克伦特罗为羊抗鼠IgG，沙丁胺醇、莱克多巴胺为兔抗绵羊IgG）。4.15抗体（克伦特罗为鼠源单抗、沙丁胺醇和莱克多巴胺均为绵羊源多抗，抗体效价应5000或有效抗体含量应5 mg/mL、ICso1.0）)。4.16HRP偶联物（克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种，交联比为（6～12）：1，以偶联物浓溶液保存，使用前需用辣根过氧化物酶标记偶联物稀释液稀释）。4.17包被IgG抗体的聚苯乙烯微量96孔反应板。4.18标准品：莱克多巴胺、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗（英文名称分别为：Ractopamine hydrochloride、Salbutamol sulfate,Clenbuterol hydrochloride),纯度≥99%。4.19标准品贮备液：准确称取标准品（折合成目标化合物10.0mg），用适量甲醇溶解，并用甲醇定容至10 mL，混匀。一18℃以下避光保存,有效期为 12个月。4.20标准品中间液：用甲醇稀释标准储备液至10mg/I，4℃以下避光保存，有效期为6个月。4.21标准品工作液：用稀释缓冲液稀释标准中间液至工作浓度0.1ug/L、0.3ug/L、0.9 μg/L、2.7 μg/L、8.1μg/L，现用现配。5仪器和设备5.1分析天平：感量0.0001g。5.2酶标仪，带有 450 nm滤光片。5.3离心机:转数≥8 000 r/min。5.4超声波发生器。5.5微量移液器：单道20 μL、50μL、100μL和多道50μL～350μL。5.615mL离心管5.7酸度计:pH测量范围 0～14。5.8涡旋式混合器。5.9旋转蒸发仪。5.10振荡器。6测定步骤6.1试样制备和保存6.1.1试样制备分别取食用活动物的血液100mL放于抗凝血试管中、新鲜尿液样品约50mL,将样品分成两等份，装入洁净容器内，作为试样密封并标明标记。6.1.2试样