SNT 2058-2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2058—2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法酶联免疫法Determination of chloramphenicol residues in royal jelly for import and export-Enzyme-linked immunosorbent assay2008-04-29 发布2008-11-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局码防伪 SN/T 2058-2008前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张晓峰、施伟良、朱振江、方莹、董强。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 2058---2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法酶联免疫法范围本标准规定了蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。·凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--1992，neqISO3696：1987）3方法提要本标准以三氯乙酸来沉淀蜂王浆中的蛋白质和提取残留的氯霉素,然后以 HLB净化。微孔板中包被有绵羊抗兔IgG抗体，加人特异性抗体（兔抗氯霉素抗体）、酶标记氯霉素、氯霉素标准品或样品提取液后，特异性抗体与包被的绵羊抗兔IgG抗体结合，同时游离氯霉素和酶标记氯霉素竞争性的与特异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的氯霉素和酶标记氯霉素，然后加入底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中氯霉素的含量。4试剂和材料除注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1氯霉素检测试剂盒(参见附录 A)4.2 甲醇。4.35%三氯乙酸:5.0g三氯乙酸以水溶解并定容至100mL4.430%甲醇：30.0mL甲醇(4.2以水定容至100mL。4.5异辛烷-三氯甲烷混合液：异辛烷、三氯甲烷以2：3(体积比)的比例混合。4.6HLB小柱：Oasis(或相当产品）,3mL(60 mg)。4.7氯霉素标准品：纯度≥98%。4.8氯霉素标准品溶液的配制：称取0.01g氯霉素标准品，以甲醇定容至100mL，配制100μg/mL的工作液，于4℃～8℃条件下保存。4.9空白样品：选用已确切知道不含有氯霉素的蜂王浆样品，作为空白样品。用于随样测试的加标监控实验。5仪器5.1酶标仪。5.2 8 道移液器:10 μL～100 μL。5.3单道移液器:10 μL～100 μL,20 μL～200 μL,100 μL～1 000 μL 和 2 mL～10 mL。5.4混合振荡器。 SN/T 2058—20085.5高速低温离心机：6000r/min。5.6固相萃取装置。5.7氮吹仪。5.8具塞试管:50ml。5.9 电子天平:0.01g～100g。6试样的制备和保存6.1试样的制备原始样品总量不得少于200g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份；冻干粉采用四分法，将样品分成两等份。分好的样品装人洁净容器，加封并做标识。6.2试样的保存试样放置一20℃～一18℃条件下保存。7分析步骤1)7.1　提取称取2.0g王浆样品，置于50mL具塞试管中,加人8mL5%三氯乙酸（4.3）,充分混匀，6000r/min离心10min，取上层液备用。HLB小柱（4.6)依次用1mL甲醇（4.2)和1mL水活化，取2.5mL上层液上柱，依次以3mL水，1mL30%甲醇（4.4)洗柱，去除残留的液体，再用2mL甲醇（4.2)洗脱，将洗脱液收集于一干净试管，氮气吹干，以0.5mL样品稀释缓冲液（试剂盒提供）溶解残留物，最后加人0.5mL异辛烷-三氯甲烷混合液（4.5)萃取，3000r/min离心10min，取上层水相进行分析供ELISA检测用，最后稀释倍数为1。王浆冻干粉则用水以1：2比例稀释，充分浸泡（2h以上）后，称取2.0g按照上述王浆前处理方法进行提取，最后稀释倍数为3。7.2测定条件7.2.1酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。7.2.2洗板条件人工洗涤次数5次以上，每次加人洗涤液量为250μL。自动洗板可以预定5次周期。7.2.3操作条件所有操作应在室温下（20℃～24℃)进行，氯霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃～24℃)后方可使用。7.3测定步骤7.3.1将测定需用的微孔板备齐并插人