SN_T 2663-2010贝类中失忆性贝类毒素检测方法 酶联免疫吸附法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2663—2010贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法Determination of amnesic shellfish poison in shellfish-Enzyme-linked immunosorbent assay2011-05-01实施2010-11-01 发布中华人，民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法SN/T 2663—2010*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880X12301/16印张 0.5字数 ９9千字2011年4月第一版·2011年4月第一次印刷，印数 1—1 600.**：定价14:00.元书号：155066·2-21748 SN/T 2663—2010言前本标准按照 GB/T 1.1一2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王秋艳、曹际娟、王刚、赵昕、郑惠芳、于兵、黄大亮、吴振兴、徐维加、郑秋月、徐君怡。 SN/T 2663—2010贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法‧范围1本标准规定了贝类及其制品中失忆性贝类素检验的酶联免疫吸附法本标准适用于贝类及制品中失忆性贝类毒素的检测。2术语、定义和缩略语2.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1. 1amnesic shellfish poison; ASP失忆性贝类毒素化学结构以软骨藻酸为代表，摄食后可产生头晕目眩，定向力障碍及持续性短期记忆缺失等症状的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称，它是一类具有神经兴奋的氨基酸类物质。2: 1. 2软骨藻酸·‘domoicacid;DA主要由拟菱形藻属硅藻产生的一种谷氨酸和红藻酸的类似物;能够污染鱼贝类等海洋生物，是引起人类记忆缺失性中毒的致病因子。2.2缩略语下列缩略语适用于本文件。ASP(amnesic shellfish poinson):失忆性贝类毒素酶联免疫吸附试验ELISA(enzyme linked immunossat3样品保存和制备.3.1样品的保存3.1.1样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异；且至少要:10:个以上。去壳贝肉、带壳的或罐装的等,均应采取足够的个数并使贝肉达200 g以上。3.1.2远离实验室不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于保温盒中冷冻送检。如为带壳样品，应按·3.2的方法开壳;去除水分后冷冻送检。3.2样品的制备3.2.1生鲜带壳样品的前处理用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用重蒸馏水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集，100 g贝肉置于筛子中沥水5 min(不要使肉堆积),检出碎壳等杂物,将贝肉均质;备用。 SN/T 2663—20103.2.2冷冻样品的前处理在室温下，使冷冻样品皇半冷冻状态。带壳冷冻样品，按-3.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后；事先已去除水分的冷冻去壳样品，室温缓化。将.100g上述贝肉均质，备用。3.2.3贝类罐头将罐头内容物沥干水分，倒人均质器充分均质，备用。3.2.4贝肉干制品称取100g:干制品放人足量清水中没泡24 h～48 h(4℃冷藏），沥干、备用。3.2.5盐溃品用清水洗涤,流水脱盐,沥干,备用。测定方法44..1测定原理本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应，酶标板上包被有针对软骨藻酸抗体的捕捉抗体，加入抗软骨藻酸抗体、标准液或样品溶液及软骨藻酸酶标记物,游离的失忆性贝类毒素与软骨藻酸酶标记物竟争软骨藻酸抗体，同时软骨藻酸抗体与捕捉抗体连接。没有结的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和显色剂加人到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加人反应在450hm测延微孔溶液的吸光度值，样品中的失忆性贝类毒素溶终止液后使颜色由蓝转变为黄色。液与吸光度值成反比，按绘制的标曲线定量计4. 2试剂和材料除另有规定外，所有化学试剂均为分析纯戟生化试剂，水为重蒸馏4.2.1 无水甲醇。，4.2.2°半对数坐标纸。4.2.3：DA标准物质。4.2.4DA酶标记物。4.2.5抗 DA抗体。4.2.6包被有捕捉抗体的微孔板。4.2.7基质（过氧化氢）/发色剂（四甲基联苯胺）4.2