SN_T 1573-2013出口贝类中神经性贝类毒素检测方法 小鼠生物法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T替 SN/T 1573—2005出口贝类中神经性贝类毒素检测方法小鼠生物法Determination of neurotoxic shellfish poisons in shellfish for export-Mouse biology method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布0国家质量监督检验检疫总局375李 SN/T言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准代替SN/T1573-2005《贝类中神经性贝类毒素检验方法小鼠生物法》。本标准与SN/T1573一2005相比，除编辑性修改外，主要技术性变化如下：增加规范性引用文件，引用标准APHA，1985；修改了术语和定义中关于鼠单位的定义部分内容；修改了样品保存和制备的部分内容；一修改了测定方法的部分内容；修改了结果表述的部分内容；-增加了健康和安全内容。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵昕、王秋艳、徐杨、郑秋月、屈菲、徐静、曹际娟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 1573—2005。T SN/T 1573--2013出口贝类中神经性贝类毒素检测方法小鼠生物法1范围本标准规定了贝类及其制品中神经性贝类毒素的小鼠生物测定方法。本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素的检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用的必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法GB14925实验动物环境及设施3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1神经性贝类毒素 Neurotoxicsheufish poisNSD化学结构以短裸甲藻毒素（brfvetoxin)为代表，摄食后可产生神经性和消化道症状的存在贝肉内的海洋生物毒素物质的总称。3.2鼠单位mouse unit;MU对体重为20g的小白鼠腹腔注射1ml贝类提取液后，在930min内死亡所需的最小毒素量为1个鼠单位3.3中位数 median data把变量值按大小次序排列，居于中间位置的那个数值就是中位数。4　方法提要用乙醚提取贝类中NSP毒素，经减压蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水为分散介质，制备NSP1%吐温-60生理盐水混悬液,将该混悬液注射人腹腔，观察小鼠存活情况，计算其毒力。5 试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。5.1浓盐酸5.2 无水乙醚。5.31%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60,溶于生理盐水(0.85%氯化钠)中，并定容至100.0mL。 SN/T 1573—20135.4　小白鼠：体重为19g～21g的健康ICR品系雄性小鼠。5.5标准品：短裸甲藻毒素（brevetoxin-2）。6仪器和设备6.1旋转蒸发器。6.2均质器。6.33天平：感量0.1g。6.4分液漏斗。6.5圆底烧瓶。6.6布氏漏斗。6.7次性注射器:1 mL。6.8 秒表。6.9加热器。7样品保存和制备7.1样品的保存7.1.1分析样品要有充分的代表性，样品至少要10个以上，尽可能没有个体差异。去壳、带壳或罐装的贝肉，均应采取足够的个数并使贝肉达200 g以上。7.1.2不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于保温盒中冷冻送检。如为带壳样品，应按7.2的方法开壳，去除水分后冷冻送检。7.2样品的制备7.2.1生鲜带壳样品的前处理用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用蒸馏水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集200g贝肉置于筛子中沥水5min（不要使肉堆积），检出碎壳等杂物，将贝肉均质，备用7.2.2冷冻样品的前处理在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按7.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后；事先已去除水分的冷冻去壳样品，室温缓化。将200g上述贝肉均质，备用。7.2.3贝类罐头将罐头内容物沥干水分，倒人均质器充分均质，备用。7.2.4贝肉干制品称取100g干制品放人足量清水中浸泡24h～48h（4℃冷藏），沥干，均质，备用。7.2.5盐渍品用清水洗涤，流水脱盐，沥干，均质，备用。2 SN/T 1573—20138检测步骤8.1试样提取8.1.1取100g按