金黄色葡萄球菌(ATCC6538)蛋白A基因的克隆及应用研究的开题报告.docxVIP

金黄色葡萄球菌(ATCC6538)蛋白A基因的克隆及应用研究的开题报告 一、选题背景 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种广泛存在于人及动物体内的病原性细菌，能够引起多种感染如皮肤感染、呼吸道感染、血液感染等，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）尤其具有潜在危险。MRSA感染难以治愈，导致许多医疗机构护理相关感染和社区获得性感染，成为严重的公共卫生问题。 金黄色葡萄球菌的蛋白A（Protein A）是其重要的细胞壁组分，具有特异性结合免疫球蛋白的能力，常被用于快速检测金黄色葡萄球菌感染。因此，研究金黄色葡萄球菌蛋白A基因的克隆及应用具有重要的现实意义。 二、研究目的 本研究旨在克隆金黄色葡萄球菌蛋白A基因，并建立基因工程表达系统，制备高纯度的蛋白A蛋白，用于快速检测金黄色葡萄球菌的感染。 三、研究内容及技术路线 1. 金黄色葡萄球菌蛋白A基因的克隆 使用PCR方法从金黄色葡萄球菌ATCC6538的基因组DNA中扩增蛋白A基因，并将其克隆至表达载体中。 2. 基因工程表达系统的构建 构建重组表达载体，包括启动子、引物、选择标记、表达标记等，将蛋白A基因插入载体中，转化至宿主菌E.coli BL21中。 3. 蛋白A的制备与纯化 使用大规模表达系统进行表达，收集相关菌株，通过多步层析纯化，获得纯度较高的蛋白A蛋白。 4. 蛋白A的结构分析及应用研究 利用蛋白质电泳、Western blot、质谱等方法对蛋白A进行分析，研究其分子结构及其结合IgG的活性。同时，开发快速检测金黄色葡萄球菌感染的方法。 四、预期成果 通过本研究，成功克隆了金黄色葡萄球菌蛋白A基因，构建了基因工程表达系统，并成功制备了高纯度的蛋白A蛋白。同时，预计能够开发出一种基于蛋白A的快速检测金黄色葡萄球菌感染的方法。这些成果将有助于更好地掌握金黄色葡萄球菌的感染机制，并为该菌的快速检测和防治提供新的手段和思路。