SN_T 2700-2010母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2700—2010母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程Protocol of complement fixation test for enzootic abortion of ewes(Ovine chlamydiosis)2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局意数码防伪 SN/T 2700—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、湖北省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：张汉协、刘泽文、陈平、徐涤平、段正赢、汪宏才、杨宜生。I SN/T2700—2010母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程1范围本标准规定了母羊地方性流产（羊衣原体病）补体结合试验操作规程，本标准适用于母羊地方流行性流产的血清学诊断和流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求3缩略语下列缩略语适用于本文件。CF（complementfixationtest）：补体结合试验4设备、材料和试剂4.1器材：12X37mm试管、试管架、水浴箱、U型微量滴定板（8孔X12孔）。4.2补体：由指定单位供应，按说明书使用和保存4.3溶血素：由指定单位供应4.4敏化红细胞：制备及使用方法见附录A中表注。4.51%绵羊红细胞悬液：制备方法见附录B。4.6抗原和标准阳性血清、阴性血清：由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所供应，按说明书使用。5采样、送检和处理按常规方法采血，分离血清，要求不溶血、无腐败，在血清中加入0.01%硫柳汞或0.1%叠氮钠防腐，2℃~8℃保存，试验前需58℃~59℃灭活30min。6操作步骤6.1预备试验6.1.1补体效价滴定：试验前应对补体进行效价滴定。滴定方法见附录A，6.1.2溶血素效价滴定：试验前应对溶血素进行效价滴定，以后每隔2个月测定效价一次。滴定方法见附录C。1 SN/T2700—20106.1.3抗原、阳性血清效价滴定：抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录D。6.2正式试验（包括试管法和微量法）6.2.1试管法：按表1的程序操作。试验要同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。表1补体结合试验（试管法）单位为毫升照被检血清各项对抗补体阳性阴性抗原生理效成分管试验溶血素盐水价对照血清血清对照1 : 41 : 81:161:3221:641:1281 : 42个工作量1 : 42个工作量0. 10.10.10. 10. 10.10. 10. 1血清0.12工作量0. 0.10. 10. 10. 10. 1抗原2单位0. 20.20. 20. 20. 20. 20. 20. 20. 20. 20.2补体生理盐水0. 10. 10. 20. 4混匀，4℃16h~18h感作，取出后37℃水浴30min敏化0. 20. 20. 20. 2 0. 0. 20.20.20. 2红细胞混匀，37℃水浴30min++++###X++结果1:32全全25%50%75%判定全溶全溶全溶全溶全溶全不溶全不溶不溶不溶溶溶溶6.2.2微量法：用U型8X12孔反应板。按表2的程序操作。试验同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。表2补体结合试验（微量法）单位为微升天照被检血清项对抗补体阳性阴性抗原生理效成分试验孔溶血素价对照血清血清对照盐水2个工作量2个工作量1 : 41 : 81 :16: 321:641:1281 : 41 : 4252525252525252525血清2工作量252525252525252525抗原2单位5050505050505050505050补体25生理盐SN/T2700—2010单位为微升表2（续）各项对照被检血清效生理阳性阴性抗原抗补体溶血素成分试验孔价对照盐水血清血清对照2个工作量2个工作量1 : 41:161:321:6411:1281 : 4混匀，4℃16h～18h感作，取出后37℃水浴30min敏化505050505050505050505050红细胞混勺，37℃水浴30min#+++++#结果1 : 3275%全全25%50%判定全溶全溶全溶全不溶全溶全不溶全溶溶溶溶不溶不溶7结果判定7.1在最后一次37℃水浴（或汽浴)30min后，立即进行试验结果判定。7.2各组对照为如下结果时试验方成立，否则应重复试验：被检血清抗补体对照：