WS_T 570-2017肠道蠕虫检测 改良加藤厚涂片法.pdf

ICS 11. 020C 62中华人民共和国卫生行业标准WS/T 5702017肠道虫检测改良加藤厚涂片法Detection of intestinal helminths The Kato-Katz method2017 - 08 - 01 发布2018-02-01 实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发 布 WS/T 570—2017前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、江西省寄生虫病防治研究所、云南省大理州血吸虫病防治研究所。本标准主要起草人：陈颖丹、诸廷俊、周长海、许静、郑彬、李石柱、肖宁、周晓农、曾小军、刘宏坤。I WS/T 570—2017肠道蠕虫检测改良加藤厚涂片法1范围本标准规定了改良加藤厚涂片法检测肠道蠕虫的操作流程本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体粪便内蠕虫卵的检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1改良加藤厚涂片法theKato-Katzs method通过过滤，定量板取样，用甘油浸泡的亲水性透明玻璃纸对粪样进行透明的一种粪便中蠕虫卵的定性与定量检测方法，2. 2每克粪便虫卵数 eggs per gram；EPG1g粪便中某种寄生虫卵的数目，是用来表示感染强度的指标。2. 3肠道蠕虫 intestinal helminth寄生于人体肠道内借助肌肉伸缩而做蠕形运动的多细胞无脊椎动物23仪器设备生物显微镜（100×~400×）和测微尺。4试剂材料4.1试剂透明液的成分及配制：由纯甘油100ml、3%孔雀绿（或亚甲基蓝）水溶液1ml和蒸馏水100ml配制而成。4.2材料4.2.1塑料定量板1 WS/T 570—2017规格为30mm×40mm×1mm，中央孔为圆台形，其上底半径3mm，下底半径4mm，高1mm，容积为38.75mm。4.2.2刮棒60mm×6mm×2mm，一端平头，另一端为斜切面，斜切面斜边长8.23mm。4.2.3尼龙绢80目，即每英寸（25.4mm）长度内的筛孔数目为80，裁剪成8cm×8cm大小。4.2.4亲水性透明玻璃纸厚40μm，裁剪成25mm×40mm大小，使用前在透明液中浸泡24h以上。4.2.5载玻片76.2mm ×25. 4mmX1mmc5检测步骤5.1样本采集检测样本为新鲜的粪便。采集受检者粪便约30g，存放于广口带盖且防渗漏的密闭容器中，将受检者基本信息（姓名、编号、送检日期）标记于容器外部。采集后的样本应在24h内送检如未能及时检测，应在4℃条件下保存。5.2改良加藤厚片制作5.2.1取一张洁净的载玻片，在一端标注样本编号。将塑料定量板小孔朝上放置在载玻片中部。5.2.2将尼龙绢平放在粪便上摊开，用刮棒轻压尼龙绢，使尼龙绢与粪便紧密贴合，再用刮棒在尼龙绢上方刮取粪便。5.2.3将通过尼龙绢刮出的粪样填入定量板的中央孔中，直至填满刮平。5.2.4垂直向上移去定量板，使粪样留在载玻片上。5.2.5取一张已浸泡过的亲水性透明玻璃纸，抖掉多余的浸泡液后，覆盖在粪便上。取另一块洁净载玻片十字交叉垂直均匀轻压粪样，使亲水性透明玻璃纸下的粪便均匀展开，不溢出载玻片形成厚薄一致的圆形粪膜，粪膜直径约2cm。5.2.6用拇指固定亲水性透明玻璃纸，将用来压粪样的载玻片轻轻平移取下，制好的改良加藤厚涂片放置在室温下使其透明，透明时间不易超过2h。5.3镜检将已透明的改良加藤厚涂片置于生物显微镜下镜检，在10×物镜下按一定规律，如由上到下，由左至右检查全片，如需进一步鉴别在40×物镜下观察。5.4结果判定2 WS/T 570—20175.4.1根据改良加藤厚涂片中虫卵的大小、形状、颜色、卵壳、内容物、卵盖、小棘等特征综合判定虫种（参见附录A）。5.4.2计数改良加藤厚涂片中虫卵数量，计算EPG，并判定感染强度（参见附录B）。5.5注意事项5.5.1粪膜透明后应及时镜检。若透明过度，薄壳虫卵易变形不易辨认，容易造成漏检或误判。般在室温25℃、75%湿度下，改良加藤厚片放置不宜超过2小时。若空气湿度大，气温较低，放置时间可适当延长。空气干燥，气温高，放置时间适当缩短。透明时切忌为了缩短透明时间而将改良加藤厚片放入烤箱或在阳光下暴晒。5.5.2在药物疗效考核等防治专项研究中，EPG的计算还须再乘以粪便系数（成形便1，半成形便1.5，软便2，粥样便3，水泻便4），得到每克粪便虫卵数。由于儿童粪便总量比成人少，因此儿童每单位体积粪便中含虫卵数比成人多，故应以成人为标准，按比例减少，即儿童粪便所得虫卵数，1岁-2岁的乘以25%，3岁-4岁的乘以50%，5岁-10岁的乘以75%，11岁以上不减少。3 WS/T 570—2017附录A（资料性附录）人体粪便中蠕虫卵鉴别A.1虫卵种类通过改良加藤厚涂片法能