NYT 1663-2008乳与乳制品中β-乳球蛋白的测定聚丙烯酰胺凝胶电泳法.pdf

ICS 67.120.01B 45NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1663—2008乳与乳制品中β一乳球蛋白的测定聚丙烯酰胺凝胶电泳法Determination of β-lactoglobulin content in milk and dairy productsSDSelectrophoresis2008-08-10实施2008-07-14 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1663-—2008前創言本标准中附录 A 为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（上海）。本标准主要起草人：孟瑾、黄菲菲、韩奕奕、吴榕、陈美莲、何亚斌、王建军、韩惠雯T NY/T 1663-—2008乳与乳制品中β-乳球蛋白的测定聚丙烯酰胺凝胶电泳法1 范围本标准规定了乳与乳制品中β-乳球蛋白的SDS凝胶电泳测定方法。本标准适用于乳与乳制品（生牛乳、奶粉、液态乳、奶酪、乳清粉)中β-乳球蛋白的测定。本标准液态样品的检出限24mg/100mL，固液态和固体样品的检出限240mg/100g。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用 SDS凝胶电泳后，用光密度计对β-乳球蛋白进行测定分析,求得β-乳球蛋白的含量。4 试剂除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂;实验用水应符合GB/T 6682中-级水的规定。4. 1 冰醋酸(CH:COOH)4.2 磷酸(H;PO4)4. 33硫酸铵((NH4）2SO4)4. 4 过硫酸铵((NH4)2S2O:)4. 5甲醇(CH:OH)4. 6乙醇(CHsOH)4.7 丙三醇(C,H:O3)4.8 甘氨酸(C,HsNO2)4. 9三羟甲基氨基甲烷(CH1NO3）:生化级4. 100β-巯基乙醇(C,H.OS):生化级4. 11 丙烯酰胺(CHsNO)4.122N-N-甲叉双丙烯酰胺(CH1oNzOz2）:生化级4. 133十二烷基磺酸钠(Ci2H25SO:Na)：生化级4.14 N,N,N,N-四甲基乙二胺(C.H1N²）:生化级4. 155溴酚蓝(Crg HioBr4 OsS)4. 166考马斯亮蓝 R-2501 NY/T 1663-20084.17盐酸溶液4 mol/L,量取 36 mL浓盐酸(HCl)注人 50 mL水中,定容至 100 mL,混匀。4.18丙烯酰胺单体贮备液准确称取14.55g丙烯酰胺（4.11)、0.45gN-N-甲叉双丙烯酰胺(4.12),先用 40mL水溶解，搅拌，直至溶液变澄清透明,再用水稀释至50mL，过滤，备用。该贮备液在4℃下棕色瓶中可保存一个月。注：丙烯酰胺单体都是中枢神经毒物，小心操作。4. 19浓缩胶缓冲液贮备液,1 mol/L,pH 6.8准确称取 6.06g三羟甲基氨基甲烷(4.9),溶解于 40mL水中，用盐酸溶液（4.17)调节 pH至6.8后，用水定容至 50mL，4℃下保存。4.20分离胶缓冲液贮备液,1.5mol/L,pH 8.8准确称取 9.08 g三羟甲基氨基甲烷(4.9),溶解于 40 mL水中，用盐酸溶液（4.17)调节 pH至 8.8后，用水定容至 50mL，4℃保存。4.21过硫酸铵溶液，100g/L准确称取0.1g过硫酸铵（4.4）,加1mL水溶解，使用前配制。4.22十二烷基磺酸钠溶液，100 g/L准确称取5g十二烷基磺酸钠（4.13），用水溶解定容至50mL，室温保存。4.23N,N,N,N-四甲基乙二胺溶液,体积分数为 10%量取 0.10 mL N,N,N,N-四甲基乙二胺(4.14),加水稀释定容至 1.00mL。4.24样品缓冲液，0.08mol/L精确称取4mg溴酚蓝（4.15），溶解于5.00mL水中，分别量取1.60mL浓缩胶缓冲液贮备液（4.19）、4.00mL十二烷基磺酸钠溶液（4.22）、1.20mLβ-巯基乙醇（4.10）、2.20 mL丙三醇（4.7），全部混合后用水稀释定容至20mL，4℃保存。4.25电极缓冲液，pH 8.3分别准确称取3.0g三羟甲基氨基甲烷（4.9）、14.4g甘氨酸（4.8），加人十二烷基磺酸钠溶液(4.22)10 mL,调节 pH 至 8.3,定容至 1 000 mL。4.26考马斯亮蓝染色液,2.5g/L称取0.25g考马斯亮蓝R-250(4.16)和10g硫酸铵（4.3），分别加人2