SN_T 3165-2012高粱根腐病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3165—2012高梁根腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of sorghum milo disease[Periconia circinata (L. Mangin)Sacc. 2012-05-07 发布2012-11-16 实施中华人民共和国568发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 3165—2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局技术中心。本标准主要起草人：林石明、廖富荣、吴媛、陈青、陈红运、黄莲英、王宏毅。 SN/T 3165-2012高梁根腐病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了高粱根腐病菌的检测和鉴定方法。本标准适用于高粱等种子、苗木及其根围栽培介质中高粱根腐病菌的检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法SN/T1809进出境植物种子检疫规程SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3方法原理本标准通过分离培养，根据菌落形态特征，病原菌无性世代的分生孢子梗和分生孢子的形态特征，病菌所引起的主要为害症状，在感病寄主植物接种后产生的典型症状，对该病原进行鉴定。其他有助于该病菌检测鉴定的相关资料参见附录A。4仪器设备和试验用具4.1仪器设备离心机，显微镜（20×～1000×；或带底光源的立体显微镜，8×～100×），培养箱L（5～50）±2℃，带定时器，近紫外光或黑光灯光源门，回旋式振荡器，天平，高压灭菌锅，冰冻切片机，超净工作台，恒温水浴锅等。4.2试验用具移液器，培养Ⅲ（直径 9.0 cm～12 cm），吸水纸或滤纸（直径8.0 cm～11cm），筛网（孔径0.047 mm），pH计，血球计数板,离心管等。5试剂和培养基5.1试剂次氯酸钠（1%），酒精，琼脂，蔗糖，甘油（30%～50%）等。5.2 培养基马铃薯培养基（PDA）（参见附录B）。1 SN/T 3165—20126抽样检查按照SN/T1809及SN/T2122规定进行取样。７ 病菌分离7.1种子样品7.1.1洗涤检验称取50g或适量的种子，加无菌水100mL，在振荡器中振荡5min，取洗涤液在1000r/min离心3min，充上清液，加适量席尔氏液（其配制方法见GB/T18085），镜检沉淀物。7.1.2吸水纸培养法检查异常的种子，或随机挑取种子，每份样品至少检测200粒种子。用蒸馏水将吸水纸充分湿润（避免产生多余的水），种子均勾地置手在吸水纸上（如直径9cm的培养皿约25粒/皿），加盖后在25℃～30℃、12h紫外光/12h黑暗下培养。5d~7d后观察培养结果，可疑的菌落进行纯化。7.1.3冷冻培养法播种后的种子先在20℃下培养24h,之后于二20℃冷冻24h最后于25℃～30℃，12h紫外光/12 h黑暗下培养。5d～7d后观察培养结果，挑取菌落边缘菌丝进行纯化。7.2植物组织将植物组织用1%的次氯酸钠消毒2min，用无菌水冲洗，在无菌条件下晾干，放置在保湿滤纸上，室温下培养2周。如果产生特往性的产孢体（参见图A.4），将孢子抖落在PDA培养基上，挑取单个萌发的孢子进行纯化。培养基制备参见附录B。7.3根围栽培介质样品称取风干根围栽培介质10g研碎，加人50ml饱和蔗糖溶液，充分搅拌5min后，静置，取悬浮液30mL于50mL的离心管中，再加人.10mL的40%（质量浓度）蔗糖溶液，6000g离心10min～15min；取上清液用300目（孔径0.047mm）筛网过筛，取过滤液在PDA培养基上进行单孢分离培养（30℃，12h紫外光/12h黑暗）。培养基制备参见附录B。8 病菌鉴定8.1 症状特征病害危害高粱的整个生育阶段。发病植株的叶片菱、卷曲、黄化，穗部的籽粒发育不良。成熟的籽粒没有特别症状。根部和根冠受害后影响植株的生长，严重抑制花穗的发育。苗期发病呈缺水状的萎，小苗根部皮层、维管束呈褐色水渍状，细根软化并腐烂。成株染病叶片下垂稍卷曲，老叶片黄化，从叶尖端和叶缘开始干枯。发病严重时，根全部腐烂，幼苗枯死。剖开病根和根冠处，组织发红并扩展到维管束组织。2 SN/T 3165—20128.2形态特征在PDA培养基上，菌丝稀疏，污白色至灰色，生长缓慢，产生分生孢子后变暗褐色至黑色（参见图 A.1～图 A.3)。菌丝有的无色透明，有的厚壁淡褐色，壁光滑或具小疣，宽2μm～6 μm。生长条件不适宜时，可形成厚壁孢子。厚壁孢子球形、圆柱形,光滑厚壁