NY_T 2130-2012饲料中烟酰胺的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2130—2012饲料中烟酰胺的测定高效液相色谱法Determination of niacinamide in feeds-High-performance liquid chromatography2012-02-21 发布2012-05-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2130—2012前言本标准按照GB/T 1.1—-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76)归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）。本标准主要起草人：贾青、张眉、冯西辉、李会玲、李胜、郭洁、王均良。 NY/T 2130—-2012饲料中烟酰胺的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中烟酰胺含量的高效液相色谱检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中烟酰胺的测定。本标准的定量限为 1 mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1　饲料　采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3原理试样中的烟酰胺经提取液提取、离心后,取上清液过0.45μm滤膜，用高效液相色谱仪一紫外／二极管阵列检测器检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682中的三级用水，色谱用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.1甲醇:色谱纯。4.2异丙醇:色谱纯。4.3辛烷磺酸钠：色谱纯。4.40.1%辛烷磺酸钠(pH=2.1)：称取1g辛烷磺酸钠（4.3)加约800mL一级水溶解，用高氯酸调pH=2.1,级水定容至 1000 mL,混匀,过0.45 um滤膜。4.5样品提取液：800mL水中加入50mL乙腈，10mL冰乙酸混合，用水定容至1000mL,混匀。4.6烟酰胺标准储备液：称取烟酰胺标准品（纯度≥98%)0.1g(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中，用提取液（4.5)溶解并定容，该溶液浓度为1mg/mL，置 4℃冰箱中保存，有效期3个月。4.7烟酰胺标准中间液：准确吸取5.0mL烟酰胺标准储备液（4.6）于100mL容量瓶中，用提取液（4.5)稀释至 100mL。该溶液浓度为 50μg/mL，置 4℃冰箱中保存,有效期1个月。4.8烟酰胺标准工作液：准确移取10.0mL烟酰胺标准中间液（4.7)至100mL容量瓶中，用提取液（4.5)稀释定容。该系列标准溶液浓度为 5.0 μg/mL。有效期 1 周。4.90.45um有机微孔滤膜5仪器设备实验室常用仪器、设备及以下设备。1 NY/T 2130--20125.1高效液相色谱仪：配备紫外或二极管阵列检测器。5.2离心机:转速为5 000 r/min以上。5.3超声波清洗器。6试样采集及样品的制备按GB/T14699.1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定，选取具有代表性的样品，四分法缩减分取200g，粉碎过0.45mm孔径（40目）的分析筛，混匀，装人磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1　提取准确称取适量试样（配合饲料5g，浓缩饲料2g，添加剂预混合饲料0.5g,精确到0.0001g），置100mL容量瓶中，加入提取液（4.5)约70mL，超声振荡10min，放置室温，用提取液（4.5)定容至刻度混合均匀，然后在5000r/min离心机（5.2）上离心5min，移取上清液过0.45μm滤膜（4.9)过滤，供高效液相色谱测定或提取液适当稀释后测定。7.2色谱参考条件检测波长：267nm。色谱柱:Cig柱,5 μm,柱长 150 mm,内径 4.6 mm，或性能类似的色谱柱。流动相:0.1%辛烷磺酸钠pH=2.1(4.4）：甲醇（4.1）：异丙醇（4.2)=91：7：2。流速:1.0mL/min 。柱温:25℃。进样量:20 μL。7.3 HPLC 测定取适量标准工作液（4.11)和试样制备液（7.1)测定，以色谱峰保留时间定性，以色谱峰面积积分值作单点或多点校准定量。烟酰胺标准色谱图参见图A.1。8结果计算及表示8.1结果计算饲料中烟酰胺的含量 X1，以毫克每千克(mg/kg)表示，做单点校正按式(1)计算。Xi = PoXCs XV(1)PsXm式中:P。—试样溶液峰面积值；-标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；CsV试样总稀释体积,单位为毫升（mL）；Ps --标准溶液峰面积值;试样的质量，单位为克(g)。m8.2结果表示测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结