SN_T 4419.12-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第12部分：花生.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.12—2016出口食品常见过敏原LAMIP系列检测方法第12部分：花生Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 12: Peanut2016-03-09发布2016-10-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 4419.12—2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成：第1部分：开心果；第2部分：腰果；一第3部分：胡桃；第4部分：榛果；第5部分：杏仁；第6部分：扁桃仁；第7部分：巴西坚果；第8部分：澳洲坚果；第9部分：栗子；第10部分：大豆；第11部分：羽扇豆；第12部分：花生；第13部分：葵花籽；第14部分：芝麻；第15部分：大麦；第16部分：小麦；第17部分：荞麦；第18部分：芥末；第19部分：胡萝卜；第20部分：芹菜；第21部分：牛奶；第22部分：虾。本部分为SN/T4419的第12部分，本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：刘彩霞、高宏伟、孙敏、张舒亚、陈颖、黄文胜、韩建勋、吴亚君、邓婷婷， SN/T4419.12—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第12部分：花生1范围SN/T4419的本部分规定了出口食品中过敏原花生成分特异性的环介导等温扩增（LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原花生成分特异性的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限（LOD)为0.1%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1961.2一2007食品中过敏原成分检测方法第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2花生peanut别名：落花生、长生果、泥豆。属蝶形花科（Fabaceae)落花生属（Arachis）。主要分布于亚洲、非洲和美洲。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate)LAMP：环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification）Triton X-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。1 SN/T 4419.12—20165方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用花生过敏原两对引物进行LAMP扩增特异性检测Arah2.01基因，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原花生成分。6LAMP检测方法6.1原理根据花生Arah2.01基因序列设计特异性内引物、外引物各一对，特异性识别靶序列上的6个独立区域。在链置换型DNA聚合酶的作用下，内引物与模板DNA退火、延伸，并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区，游离的内引物合成链折叠成茎环结构，以自身为模板，启动链置换扩增循环，合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加人显色液，即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的Mg?+结合，形成焦磷酸镁乳白色沉淀，故也可通过反应液的浊度变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBRGreenI是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色荧光的染料。在游离状态下,SYBRGreenI发出微弱的荧光，但一旦与dsDNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBRGreenI荧光的强度与dsDNA的量正相关，可以根据LAMP反应液的荧光强度测定反应体系中的dsDNA的量。6.21仪器和设备6.2.1水浴锅或加热模板：65℃±1℃和80℃土1℃。6.2.2离心管:0.1mL、1.5mL。6.2.3计时器。6.2.4移液枪:量程0.5μL～