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猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序列分析 猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序 列分析 中国畜牧兽医2010年第37卷第5期生物技术?103? 猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序列分析 李鹏,冯书章.,汤会琼,李文贵.,柴俊,李作生.,张以芳 (1.吉林大学畜牧兽医学院,长春130062;2.云南农业大学动物科学技术学院,昆明650201; 3.军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062;4.云南省蒙自县文澜镇畜牧站,蒙自661lOO) 摘要:本研究根据GenBank中已经发表的猪圆环病毒2型基因序列,设计了2对PCV2特异性引物,从疑似断奶仔猪多 系统衰竭综合征(postweaningrnultisystemicwastingsyndrome,PMWS)感染病例中检测出3株云南省PCV2流行株,通过ve— ro细胞分离病毒,并用透射电子显微镜观察到了约17nlTl的病毒样粒子的存在.经同源性比较分析,3个分离株之间核苷酸 同源性为99.5,99.8,与甘肃省PCV2分离株核苷酸同源性最低(90.7),浙江省分离株核苷酸同源性最高(99.7), 与南美洲分离株核苷酸同源性最低(92.0%),瑞典分离株核苷酸同源性最高(99.4),这可能与云南省猪种引进有关. 关键词:猪圆环病毒2型;分离鉴定;序列分析 中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:1671-7236(2010)05—0103—05 猪圆环病毒(porcineeircovirus,PCV)是迄今 发现的一种最小的,无囊膜的2O面体的动物病毒 (Tischer等,1982),含有一条单链,环状DNA,病毒 粒子直径平均为17nm(Fenaux等,2000;Meehan 等,1997).根据PCV的致病性,抗原性,将PCV分 为PCV1和PCV2两个血清型(Meehan等,1997; Hesse等,2008;Olvera等,2007),PCV1最初从污 染的PK15细胞上获得,无致病性(Tischer等, 1982,1986;Allan等,1995,2000).PCV2是引起断 奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisys— temicwastingsyndrome,PMWS)的主要病原,而且 还与育肥猪的猪皮炎和肾病综合征(porcinederma— titisandnephropathysyndrome,PDNS)(Allan等, 2000),怀孕母猪的繁殖障碍(Opriessnig等,2006), 新生仔猪的先天性震颤(congenitaltremors,CT) (Choi等,2002),猪呼吸道疾病综合症(porcinere— spiratorydiseasecomplex,PRDC)(Choi等,2001), 增生性和坏死性肺炎(proliferativeandnecrotizing pneumonia,PNP)的发生密切相关,范围涉及流产, 不孕,非典型猪繁殖与呼吸综合征(porcinere— spiratoryandreproductivesyndrome,PRRS)等 (Grau—Roma等,2007).世界许多国家相继报道了 郎洪武等(2000) 各自地区PMWS的发生和流行, 收稿日期:2010一O1—12 作者简介:李鹏(1976一),男,河南人,博士生,研究方向:分子细 菌学. 通信作者:张以芳,男,教授.E—mail:zyfkm@ 基金项目:云南省高端科技人才引培工程(2009CI125)项目资 助. 采集了国内7省(市)22个猪群的559份血清,用 ELISA方法检测总阳性率为42.9,通过血清学调 查和PCR检测等方法证实了中国猪群中存在 PCV2病毒.猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科, 圆环病毒属(Allan等,1999;Mankertz等,2004), PCV2全基因组为1768bp或1767bp(Gilpin等, 2003).序列分析显示,病毒通过滚环复制机制进行 病毒DNA的复制,PCV2有3个主要的开放阅读框 (ORF),ORF1编码与病毒复制相关的复制酶蛋白 (Rep和Rep)(Mankertz等,1998);ORF2编码病 毒的结构蛋白(Cap),与病毒的免疫有关(Gillespie 等,2008);ORF3编码的蛋白质是病毒复制中非必 需PCV2蛋白(Liu等,2006).0RF2有702个碱 基,编码234个氨基酸,分子质量大约是30ku,所编 码的蛋白质是PCV2囊膜的主要结构成分(Man- kertz等,2004). 为了探讨PCV2基因结构与功能的关系,本研 究对PCV2的云南株进行分离鉴定,并通过电镜观 测病毒粒